| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 捕食线虫真菌及信号调控蛋白MAPK和RGS的研究进展 | 第12-21页 |
| 1 坚粘孢单顶孢的研究概况 | 第12-14页 |
| 2 MAPK蛋白功能研究概况 | 第14-16页 |
| 3 RGS蛋白功能研究概况 | 第16-19页 |
| 4 本论文的选题依据 | 第19-21页 |
| 第二章 坚粘孢单顶孢MAPK和RGS4蛋白的性质、功能结构域预测和聚类分析 | 第21-30页 |
| 1 前言 | 第21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-22页 |
| 2.1 坚粘孢单顶孢基因组中Mapk和Rgs4两个基因和蛋白来源 | 第21-22页 |
| 2.2 坚粘孢单顶孢基因组中MAPK和RGS4蛋白的性质和保守结构域分析 | 第22页 |
| 2.4 构建坚粘孢单顶孢基因组中MAPK和RGS4蛋白的系统进化树 | 第22页 |
| 3 分析结果 | 第22-29页 |
| 3.1 坚粘孢单顶孢基因组中Mapk和Rgs4两个基因和蛋白的筛选 | 第22-24页 |
| 3.2 坚粘孢单顶孢基因组中MAPK和RGS4蛋白的分子量、等电点和保守结构域分析 | 第24-27页 |
| 3.3 坚粘孢单顶孢MAPK和RGS4蛋白的系统进化树构建 | 第27-29页 |
| 4 讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 坚粘孢单顶孢MAPK和RGS4蛋白编码基因敲除载体的构建 | 第30-44页 |
| 1 前言 | 第30页 |
| 2 实验材料及仪器 | 第30-33页 |
| 2.1 实验质粒和菌株 | 第30-31页 |
| 2.2 实验主要使用的药品及试剂 | 第31页 |
| 2.3 主要溶液及培养基 | 第31-32页 |
| 2.4 主要仪器及设备 | 第32-33页 |
| 3 实验方法 | 第33-39页 |
| 3.1 敲除载体构建方法 | 第33页 |
| 3.2 敲除片段的引物设计 | 第33-35页 |
| 3.3 坚粘孢单顶孢全基因组DNA的提取 | 第35页 |
| 3.4 质粒pCSN44和pRS426的提取 | 第35页 |
| 3.5 pRS426质粒双酶切及片段纯化回收 | 第35页 |
| 3.6 目的片段的扩增及纯化回收 | 第35-37页 |
| 3.7 酵母(FY834)感受态的制备及电转 | 第37页 |
| 3.8 酵母质粒的提取 | 第37页 |
| 3.9 酵母质粒化转入大肠杆菌 | 第37-38页 |
| 3.10 大肠杆菌转化子验证 | 第38-39页 |
| 4 实验结果 | 第39-42页 |
| 4.1 pRS426质粒双酶切 | 第39-40页 |
| 4.2 坚粘孢单顶孢中Mapk、Rgs4基因同源片段以及hph基因扩增 | 第40-41页 |
| 4.3 酵母电转化的结果 | 第41页 |
| 4.4 大肠杆菌DH5α转化子菌落PCR结果 | 第41-42页 |
| 5 讨论 | 第42-43页 |
| 6 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 坚粘孢单顶孢原生质体的制备、转化及验证 | 第44-54页 |
| 1 前言 | 第44页 |
| 2 实验材料及仪器 | 第44-46页 |
| 2.1 实验菌株 | 第44页 |
| 2.2 实验主要使用的药品及试剂 | 第44-45页 |
| 2.3 主要溶液及培养基 | 第45页 |
| 2.4 主要仪器和设备 | 第45-46页 |
| 3 实验方法 | 第46-50页 |
| 3.1 敲除载体全长片段扩增及回收 | 第46页 |
| 3.2 坚粘孢单顶孢原生质体的制备及转化 | 第46-47页 |
| 3.3 坚粘孢单顶孢敲除转化子基因组提取 | 第47页 |
| 3.4 敲除转化子PCR验证 | 第47-48页 |
| 3.5 敲除转化子Southern blot验证 | 第48-50页 |
| 4 实验结果 | 第50-51页 |
| 4.1 原生质体转化子PCR验证 | 第50页 |
| 4.2 敲除转化子的Southern blot验证 | 第50-51页 |
| 5 讨论 | 第51-53页 |
| 5.1 坚粘孢单顶孢原生质体的制备及转化 | 第51-52页 |
| 5.2 敲除转化子PCR验证 | 第52页 |
| 5.3 敲除转化子Southern blot验证 | 第52-53页 |
| 6 小结 | 第53-54页 |
| 第五章 坚粘孢单顶孢Mapk和Rgs4基因敲除株的表型特征分析 | 第54-76页 |
| 1 前言 | 第54页 |
| 2 实验材料及仪器 | 第54-55页 |
| 2.1 实验菌株 | 第54页 |
| 2.2 实验主要使用的药品及试剂 | 第54-55页 |
| 2.3 主要溶液及培养基 | 第55页 |
| 2.4 主要仪器及设备 | 第55页 |
| 3 实验方法 | 第55-56页 |
| 3.1 在不同培养基上生长速率的表型比较 | 第55页 |
| 3.2 线虫诱导产捕器比较 | 第55-56页 |
| 3.3 产孢比较 | 第56页 |
| 3.4 逆境生长情况比较 | 第56页 |
| 4 实验结果 | 第56-73页 |
| 4.1 在不同培养基上生长速率的表型比较 | 第56-59页 |
| 4.2 线虫诱导产捕器比较 | 第59-63页 |
| 4.3 产孢比较 | 第63-66页 |
| 4.4 逆境生长情况比较 | 第66-73页 |
| 5 讨论 | 第73-75页 |
| 5.1 生长速率的比较 | 第73-74页 |
| 5.2 产捕器比较 | 第74页 |
| 5.3 产孢比较 | 第74页 |
| 5.4 抗逆性比较 | 第74-75页 |
| 6 小结 | 第75-76页 |
| 全文小结 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 附录 | 第85-91页 |
| 附录1 论文中使用的质粒图谱 | 第85-86页 |
| 附录2 本文中使用的名词缩写及中英文对照 | 第86-87页 |
| 附录3 寡孢节丛孢MAPK蛋白编码基因的敲除和转化子验证 | 第87-89页 |
| 附录4 硕士期间发表和待发表的论文 | 第89-90页 |
| 附录5 硕士期间所获荣誉 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
