| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 绪论 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-22页 |
| 1 霍乱与霍乱弧菌 | 第13-16页 |
| 1.1 霍乱的流行概况 | 第13-14页 |
| 1.2 霍乱弧菌 | 第14-15页 |
| 1.3 霍乱弧菌的毒力调控系统 | 第15-16页 |
| 2 MMR系统与基因mutS | 第16-20页 |
| 2.1 MMR系统 | 第16-19页 |
| 2.2 细菌中mutS的相关研究 | 第19-20页 |
| 3 ROS与氧胁迫 | 第20-22页 |
| 3.1 ROS | 第20-21页 |
| 3.2 氧胁迫 | 第21-22页 |
| 第一章 霍乱弧菌基因mutS的体外生理研究 | 第22-50页 |
| 第一节 mutS基因的框内敲除及回补株的构建 | 第23-36页 |
| 1 材料与方法 | 第23-28页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第23页 |
| 1.2 培养基与培养条件 | 第23-24页 |
| 1.3 实验用酶及试剂 | 第24页 |
| 1.4 抗生素与浓度 | 第24页 |
| 1.5 引物 | 第24页 |
| 1.6 基本实验方法 | 第24-28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-35页 |
| 2.1 mutS基因的框内敲除 | 第28-33页 |
| 2.2 mutS回补菌株的构建 | 第33-35页 |
| 3 小结与讨论 | 第35-36页 |
| 第二节 mutS基因缺失株的突变率以及抗ROS能力的分析 | 第36-42页 |
| 1 材料与方法 | 第36-37页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第36页 |
| 1.2 培养基与培养条件 | 第36页 |
| 1.3 实验用酶及试剂 | 第36页 |
| 1.4 抗生素与浓度 | 第36页 |
| 1.5 基本实验方法 | 第36-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-41页 |
| 2.1 测定生长曲线 | 第37页 |
| 2.2 测定自发突变率 | 第37-39页 |
| 2.3 测定ROS诱导突变率 | 第39-40页 |
| 2.4 ROS杀菌实验 | 第40-41页 |
| 3 小结与讨论 | 第41-42页 |
| 第三节 mutS基因的缺失株与WT体外竞争以及ROS的影响 | 第42-50页 |
| 1 材料与方法 | 第42-43页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第42页 |
| 1.2 培养基与培养条件 | 第42页 |
| 1.3 实验用酶及试剂 | 第42页 |
| 1.4 抗生素与浓度 | 第42页 |
| 1.5 基本实验方法 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-49页 |
| 2.1 AKI培养基中体外竞争实验的测定 | 第43-46页 |
| 2.2 LB培养基中体外竞争实验的测定 | 第46页 |
| 2.3 M9培养基中体外竞争实验的测定 | 第46-48页 |
| 2.4 ROS杀菌实验(体外转接菌液) | 第48-49页 |
| 3 小结与讨论 | 第49-50页 |
| 第二章 mutS基因对霍乱弧菌生理功能的影响 | 第50-55页 |
| 1 材料与方法 | 第50-51页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第50页 |
| 1.2 培养基与培养条件 | 第50页 |
| 1.3 实验用酶及试剂 | 第50页 |
| 1.4 抗生素与浓度 | 第50页 |
| 1.5 基本实验方法 | 第50-51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-54页 |
| 2.1 乳鼠肠道定殖实验 | 第51-52页 |
| 2.2 成年鼠肠道定殖实验 | 第52-53页 |
| 2.3 体内突变率的测定 | 第53-54页 |
| 3 小结与讨论 | 第54-55页 |
| 第三章 体内分离的△mutS菌株的生理特性研究 | 第55-74页 |
| 第一节 △mutS回补株的构建 | 第55-62页 |
| 1 材料与方法 | 第55-58页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第55-56页 |
| 1.2 培养基与培养条件 | 第56页 |
| 1.3 实验用酶及试剂 | 第56页 |
| 1.4 抗生素与浓度 | 第56页 |
| 1.5 引物 | 第56页 |
| 1.6 基本实验方法 | 第56-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-61页 |
| 2.1 pJL1-mutS重组质粒的构建 | 第58-60页 |
| 2.2 mutS回补菌株的构建 | 第60页 |
| 2.3 经过体内的△mutS进行回补构建 | 第60-61页 |
| 3 小结与讨论 | 第61-62页 |
| 第二节 mutS回补菌株的体外表型分析 | 第62-70页 |
| 1 材料与方法 | 第62-65页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第62页 |
| 1.2 培养基与培养条件 | 第62页 |
| 1.3 实验用酶及试剂 | 第62页 |
| 1.4 抗生素与浓度 | 第62页 |
| 1.5 基本实验方法 | 第62-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-69页 |
| 2.1 mutS回补株以及经过体内的mutS回补株自发突变率的测定 | 第65-66页 |
| 2.2 生长曲线的测定 | 第66-67页 |
| 2.3 经过小鼠体内的霍乱弧菌ROS耐受性的检测 | 第67-68页 |
| 2.4 经过小鼠体内的mutS回补株中毒力基因tcpA表达的检测 | 第68-69页 |
| 3 小结与讨论 | 第69-70页 |
| 第三节 mutS回补菌株定殖功能的分析 | 第70-74页 |
| 1 材料与方法 | 第70-71页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第70页 |
| 1.2 培养基与培养条件 | 第70页 |
| 1.3 实验用酶及试剂 | 第70页 |
| 1.4 抗生素与浓度 | 第70页 |
| 1.5 基本实验方法 | 第70-71页 |
| 2 结果与分析 | 第71-73页 |
| 2.1 乳鼠肠道定殖实验 | 第71-72页 |
| 2.2 成年鼠肠道定殖实验 | 第72-73页 |
| 3 小结与讨论 | 第73-74页 |
| 全文总结 | 第74-75页 |
| 创新点 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 附录一 文中所用缩写 | 第81-82页 |
| 附录二 文中所用的试剂和配方 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
