| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 主要符号表 | 第22-23页 |
| 1 绪论 | 第23-48页 |
| 1.1 植物miRNAs的概述 | 第24-27页 |
| 1.1.1 植物miRNAs基因的结构特征 | 第24页 |
| 1.1.2 植物miRNAs的生物合成 | 第24-25页 |
| 1.1.3 植物miRNAs的作用机制 | 第25-26页 |
| 1.1.4 植物miRNAs家族的保守性 | 第26-27页 |
| 1.2 植物miRNAs的研究策略 | 第27-33页 |
| 1.2.1 植物miRNAs的获取方法 | 第27-29页 |
| 1.2.2 植物miRNAs靶基因的预测及验证 | 第29-31页 |
| 1.2.3 植物miRNAs的功能鉴定 | 第31-33页 |
| 1.3 植物miRNAs的生物学功能 | 第33-39页 |
| 1.3.1 miRNAs与生长发育 | 第33-36页 |
| 1.3.2 miRNAs与生物胁迫响应 | 第36页 |
| 1.3.3 miRNAs与非生物胁迫响应 | 第36-38页 |
| 1.3.4 miRNAs与激素调节 | 第38页 |
| 1.3.5 miRNAs与次生代谢产物合成 | 第38-39页 |
| 1.4 miR1916家族研究进展 | 第39-40页 |
| 1.4.1 miR1916的发现和保守性 | 第39页 |
| 1.4.2 miR1916的靶基因及功能 | 第39-40页 |
| 1.4.3 miR1916响应逆境胁迫 | 第40页 |
| 1.5 miR396家族研究进展 | 第40-46页 |
| 1.5.1 miR396的发现和保守性 | 第40-41页 |
| 1.5.2 miR396的靶基因及功能 | 第41-45页 |
| 1.5.3 miR396响应逆境胁迫 | 第45-46页 |
| 1.6 本课题主要研究思路 | 第46-48页 |
| 2 miR1916在番茄与晚疫病菌和灰霉菌互作中的调控机制 | 第48-115页 |
| 2.1 引言 | 第48-49页 |
| 2.2 实验材料及仪器 | 第49-50页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第49页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第49-50页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第50页 |
| 2.3 实验方法 | 第50-77页 |
| 2.3.1 miR1916靶基因的预测 | 第50-51页 |
| 2.3.2 病原菌的培养及接种 | 第51页 |
| 2.3.3 番茄叶片总RNA的提取 | 第51-52页 |
| 2.3.4 miRNAs和靶基因的表达分析 | 第52-54页 |
| 2.3.5 miR1916过表达载体的构建 | 第54-58页 |
| 2.3.6 STTM-miR1916沉默载体的构建 | 第58-60页 |
| 2.3.7 Anti-miR1916沉默载体的构建 | 第60-64页 |
| 2.3.8 STR-2过表达载体的构建 | 第64-66页 |
| 2.3.9 VIGS病毒载体的构建 | 第66-68页 |
| 2.3.10 根癌农杆菌工程菌的制备 | 第68-69页 |
| 2.3.11 番茄的转化及再生体系的建立 | 第69-70页 |
| 2.3.12 转基因植株的鉴定 | 第70-71页 |
| 2.3.13 miR1916靶基因切割位点的验证 | 第71-74页 |
| 2.3.14 VIGS侵染 | 第74-75页 |
| 2.3.15 抗病性检测 | 第75页 |
| 2.3.16 生理指标及病情评估 | 第75-76页 |
| 2.3.17 转基因植株化合物的分析及鉴定 | 第76-77页 |
| 2.3.18 病原菌菌丝扩展抑制检测 | 第77页 |
| 2.3.19 统计分析 | 第77页 |
| 2.4 结果与分析 | 第77-111页 |
| 2.4.1 晚疫病菌和灰霉菌侵染的番茄中miR1916的表达模式分析 | 第77-78页 |
| 2.4.2 miR1916靶基因的分析 | 第78-79页 |
| 2.4.3 STR-1与STR-2的序列分析 | 第79-80页 |
| 2.4.4 miR1916过表达载体的获得 | 第80-82页 |
| 2.4.5 pBI121-STTM-miR1916沉默载体的获得 | 第82-83页 |
| 2.4.6 pBI121-Anti-miR1916沉默载体的获得 | 第83-85页 |
| 2.4.7 pBI121-STR-2过表达载体的获得 | 第85-87页 |
| 2.4.8 根癌农杆菌工程菌的的获得 | 第87-88页 |
| 2.4.9 转基因番茄的获得 | 第88页 |
| 2.4.10 转化番茄植株的鉴定 | 第88-92页 |
| 2.4.11 miR1916潜在靶基因的初步鉴定 | 第92-93页 |
| 2.4.12 miR1916表达量的改变影响靶基因的表达 | 第93页 |
| 2.4.13 miR1916靶基因剪切位点的验证 | 第93-95页 |
| 2.4.14 miR1916表达量的改变影响番茄的抗病性 | 第95-98页 |
| 2.4.15 侵染后转基因植物的ROS水平变化 | 第98-100页 |
| 2.4.16 野生型和转基因植物提取物中的差异代谢物鉴定 | 第100-102页 |
| 2.4.17 靶基因STR-2调节α-tomatine增强番茄的抗病性 | 第102-103页 |
| 2.4.18 番茄提取物的抗菌活性 | 第103-106页 |
| 2.4.19 VIGS病毒沉默靶基因载体及工程菌的获得 | 第106-108页 |
| 2.4.20 VIGS沉默植株中相应靶基因的表达 | 第108页 |
| 2.4.21 VIGS诱导的沉默对番茄中化合物的影响 | 第108-110页 |
| 2.4.22 VIGS诱导靶基因的沉默对番茄抗病性的影响 | 第110-111页 |
| 2.5 讨论 | 第111-114页 |
| 2.6 本章小结 | 第114-115页 |
| 3 miR396在番茄与晚疫病菌和灰霉菌互作中的调控机制 | 第115-139页 |
| 3.1 引言 | 第115-116页 |
| 3.2 实验材料及仪器 | 第116页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第116页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第116页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第116页 |
| 3.3 实验方法 | 第116-120页 |
| 3.3.1 miR396靶基因的预测 | 第116页 |
| 3.3.2 miR396和靶基因的表达特性分析 | 第116-117页 |
| 3.3.3 沉默载体的构建 | 第117-118页 |
| 3.3.4 工程菌瞬时转化番茄叶片 | 第118-119页 |
| 3.3.5 miR396转化植株的检测 | 第119页 |
| 3.3.6 半定量RT-PCR | 第119页 |
| 3.3.7 靶基因下游相关基因检测 | 第119-120页 |
| 3.4 结果与分析 | 第120-135页 |
| 3.4.1 晚疫病菌和灰霉菌侵染的番茄中miR396的表达模式分析 | 第120页 |
| 3.4.2 miR396靶基因的分析 | 第120-122页 |
| 3.4.3 沉默载体的获得 | 第122-124页 |
| 3.4.4 miR396稳定表达和瞬时沉默植株的鉴定 | 第124-127页 |
| 3.4.5 miR396过表达的形态学变化 | 第127页 |
| 3.4.6 miR396过表达增加了对病原菌侵染的易感性 | 第127-129页 |
| 3.4.7 miR396过表达增加病原菌侵染的后的ROS水平 | 第129-130页 |
| 3.4.8 miR396过表达引发TGA抑制PR1表达的功能丧失 | 第130-132页 |
| 3.4.9 miR396过表达促进NPR1的表达 | 第132页 |
| 3.4.10 miR396过表达提高番茄叶片内源性SA的含量 | 第132页 |
| 3.4.11 过表达miR396抑制防御基因的表达 | 第132-135页 |
| 3.5 讨论 | 第135-138页 |
| 3.6 本章小结 | 第138-139页 |
| 4 miR1916在烟草中异源表达的功能分析 | 第139-147页 |
| 4.1 引言 | 第139页 |
| 4.2 实验材料及仪器 | 第139页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第139页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第139页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第139页 |
| 4.3 实验方法 | 第139-142页 |
| 4.3.1 miR1916在烟草中的靶基因预测 | 第139页 |
| 4.3.2 转基因烟草的获得 | 第139-140页 |
| 4.3.3 转基因烟草的鉴定 | 第140-141页 |
| 4.3.4 非生物胁迫处理 | 第141页 |
| 4.3.5 生理指标检测 | 第141-142页 |
| 4.4 结果与分析 | 第142-146页 |
| 4.4.1 miR1916转基因烟草的耐旱性 | 第142-143页 |
| 4.4.2 miR1916表达量的改变影响烟草的生化水平 | 第143-145页 |
| 4.4.3 miR1916表达量的改变影响预测的靶基因的表达 | 第145-146页 |
| 4.5 讨论 | 第146页 |
| 4.6 本章小结 | 第146-147页 |
| 5 miR396在烟草中异源表达的功能分析 | 第147-157页 |
| 5.1 引言 | 第147页 |
| 5.2 实验材料及仪器 | 第147页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第147页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第147页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第147页 |
| 5.3 实验方法 | 第147-149页 |
| 5.3.1 miR396在烟草中的靶基因预测 | 第147-148页 |
| 5.3.2 转基因烟草的鉴定 | 第148页 |
| 5.3.3 非生物胁迫处理 | 第148页 |
| 5.3.4 生理指标检测 | 第148-149页 |
| 5.4 结果与分析 | 第149-155页 |
| 5.4.1 miR396及靶基因在转基因烟草中表达的检测 | 第149-150页 |
| 5.4.2 miR396的过表达改善转基因烟草植物的耐盐性 | 第150-152页 |
| 5.4.3 miR396的过表达增强转基因烟草植株的耐旱性 | 第152-153页 |
| 5.4.4 miR396的过表达提高了对寒冷胁迫的抗性 | 第153-155页 |
| 5.5 讨论 | 第155-156页 |
| 5.6 本章小结 | 第156-157页 |
| 6 结论与展望 | 第157-159页 |
| 6.1 结论 | 第157页 |
| 6.2 创新点 | 第157-158页 |
| 6.3 展望 | 第158-159页 |
| 参考文献 | 第159-172页 |
| 附录A 培养基配方 | 第172-173页 |
| 附录B 质粒图谱 | 第173-174页 |
| 附录C 本论文克隆及人工合成的DNA序列 | 第174-177页 |
| 作者简介 | 第177页 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第177-179页 |
| 致谢 | 第179页 |
