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α-金盏花酸和β-金盏花酸对绒毛膜癌JEG-3细胞凋亡和迁移的影响

摘要第4-5页
Abstract第5页
第一章 文献综述第10-19页
    1.1 前言第10页
    1.2 细胞凋亡第10-13页
        1.2.1 细胞凋亡的检测第11-12页
            1.2.1.1 形态学观察第11页
            1.2.1.2 生物化学实验方法第11页
            1.2.1.3 酶联免疫分析第11页
            1.2.1.4 流式细胞仪观察第11-12页
            1.2.1.5 分子生物学检测第12页
        1.2.2 细胞凋亡的分子机理第12-13页
            1.2.2.1 Bcl-2基因家族第12页
            1.2.2.2 抑癌基因p53第12-13页
            1.2.2.3 Caspase蛋白酶家族第13页
    1.3 细胞迁移第13-15页
        1.3.1 细胞迁移的检测第13-14页
            1.3.1.1 transwell实验第13-14页
            1.3.1.2 划痕实验第14页
            1.3.1.3 细胞隔离侵袭实验第14页
            1.3.1.4 微流体技术第14页
        1.3.2 细胞迁移相关因子第14-15页
            1.3.2.1 基质金属蛋白酶第14-15页
            1.3.2.2 血管生成因子VEGF第15页
    1.4 不饱和脂肪酸对细胞凋亡及迁移影响的研究进程第15-17页
        1.4.1 共轭亚麻酸第15页
        1.4.2 参与不饱和脂肪酸对细胞凋亡及迁移作用的细胞信号第15-17页
            1.4.2.1 氧化应激第16页
            1.4.2.2 p38 MAPK信号通路第16-17页
            1.4.2.3 脂质过氧化物酶体增殖物激活受体-γ第17页
    1.5 选题的意义第17-18页
    1.6 研究内容第18-19页
第二章 实验材料与方法第19-33页
    2.1 实验材料第19-22页
        2.1.1 细胞第19页
        2.1.2 材料第19-21页
        2.1.3 仪器设备第21-22页
    2.2 试剂配制第22-24页
        2.2.1 药物配制第22-23页
        2.2.2 磷酸盐缓冲溶液第23页
        2.2.3 MTT溶液第23页
        2.2.4 Hoechst33342溶液第23页
        2.2.5 蛋白免疫印迹主要试剂配方第23-24页
            2.2.5.1 10%过硫酸胺第23页
            2.2.5.2 1X电泳缓冲液第23页
            2.2.5.3 转移缓冲液第23-24页
            2.2.5.4 PBST缓冲液第24页
            2.2.5.5 封闭剂第24页
            2.2.5.6 显影液第24页
            2.2.5.7 定影液第24页
        2.2.6 Giemsa染液的配制第24页
        2.2.7 Sorensen缓冲液的配制第24页
    2.3 实验方法第24-33页
        2.3.1 JEG-3细胞培养第24-26页
            2.3.1.1 细胞复苏第25页
            2.3.1.2 细胞传代第25页
            2.3.1.3 细胞冻存第25-26页
        2.3.2 细胞活力检测第26页
        2.3.3 BCA法检测蛋白浓度第26-27页
        2.3.4 细胞毒性测定第27页
        2.3.5 Hoechst 33342染色第27页
        2.3.6 流式细胞仪检测细胞凋亡第27-28页
        2.3.7 划痕实验第28页
        2.3.8 Transwell侵袭实验第28-29页
        2.3.9 细胞内活性氧的检测第29页
        2.3.10 丙二醛和谷胱甘肽水平的检测第29页
        2.3.11 蛋白免疫印迹第29-31页
            2.3.11.1 电泳分离第30页
            2.3.11.2 转膜第30-31页
            2.3.11.3 封闭第31页
            2.3.11.4 一抗孵育第31页
            2.3.11.5 二抗孵育第31页
            2.3.11.6 ECL显影第31页
        2.3.12 统计分析第31-33页
第三章 结果与讨论第33-50页
    3.1 α-金盏花酸和β-金盏花酸对JEG-3细胞活力的影响第33页
    3.2 α-金盏花酸和β-金盏花酸对LDH释放的影响第33-35页
    3.3 α-金盏花酸和β-金盏花酸对绒癌JEG-3细胞凋亡的诱导作用第35-38页
        3.3.1 荧光显微镜检测α-金盏花酸和β-金盏花酸对JEG-3细胞凋亡诱导作用第35-36页
        3.3.2 流式细胞仪检测α-金盏花酸和β-金盏花酸对JEG-3细胞凋亡率的影响第36-37页
        3.3.3 凋亡相关蛋白表达的检测第37-38页
    3.4 α-金盏花酸和β-金盏花酸对绒癌JEG-3细胞迁移的影响第38-40页
        3.4.1 Transwell实验检测绒癌JEG-3细胞迁移能力第38-39页
        3.4.2 划痕实验检测绒癌JEG-3细胞迁移能力第39-40页
    3.5 P38 MAPK参与α-金盏花酸和β-金盏花酸对JEG-3细胞的作用第40-43页
        3.5.1 α-金盏花酸和β-金盏花酸对p38 MAPK活化的影响第40-41页
        3.5.2 SB203580拮抗α-金盏花酸和β-金盏花酸对JEG-3细胞活力的抑制作用第41-42页
        3.5.3 SB203580拮抗α-金盏花酸和β-金盏花酸诱导JEG-3细胞凋亡的作用第42-43页
            3.5.3.1 SB203580对JEG-3细胞凋亡形态的影响第42页
            3.5.3.2 SB203580对JEG-3细胞凋亡相关蛋白表达的影响第42-43页
        3.5.4 SB203580拮抗α-金盏花酸和β-金盏花酸对JEG-3细胞迁移的影响第43页
    3.6 氧化应激参与α-金盏花酸和β-金盏花酸对绒癌JEG-3细胞的作用第43-48页
        3.6.1 α-金盏花酸和β-金盏花酸诱导细胞内活性氧的积累第43-45页
        3.6.2 丙二醛和谷胱甘肽水平的变化第45-46页
        3.6.3 NAC、α-生育酚拮抗α-金盏花酸和β-金盏花酸对JEG-3细胞活力的抑制作用第46-48页
        3.6.4 氧化应激介导p38 MAPK参与的α-金盏花酸和β-金盏花酸对JEG-3细胞的作用第48页
    3.7 讨论第48-50页
第四章 结论第50-51页
参考文献第51-55页
致谢第55页

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