| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 概述 | 第10-12页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第12-16页 |
| 1.2.1 主要黄酮木脂素类化合物的生物活性 | 第12页 |
| 1.2.2 水飞蓟宾合成途径研究 | 第12-13页 |
| 1.2.3 松柏醇及其主要来源 | 第13-14页 |
| 1.2.4 黄杉素及其主要来源 | 第14-15页 |
| 1.2.5 微生物合成黄酮类化合物研究进展及解脂亚洛酵母优势 | 第15-16页 |
| 1.3 本论文主要研究内容 | 第16-18页 |
| 1.3.1 立题依据和研究意义 | 第16-17页 |
| 1.3.2 本论文主要研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 水飞蓟宾原生合成途径解析 | 第18-35页 |
| 2.1 前言 | 第18-19页 |
| 2.2 材料与方法 | 第19-22页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.2.2 水飞蓟宾、黄杉素和松柏醇浓度分析 | 第19-20页 |
| 2.2.3 蛋白质提取和过氧化物酶分析 | 第20页 |
| 2.2.4 水飞蓟宾仿生合成反应 | 第20-21页 |
| 2.2.5 RNA测序、从头组装和数据分析 | 第21页 |
| 2.2.6 重组蛋白的表达、纯化和活性分析 | 第21-22页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第22-33页 |
| 2.3.1 水飞蓟宾及其前体分布的组织差异性分析 | 第22-23页 |
| 2.3.2 水飞蓟不同组织器官转录组分析 | 第23-27页 |
| 2.3.3 过氧化物酶催化水飞蓟宾合成分析 | 第27-29页 |
| 2.3.4 水飞蓟宾原生合成途径解析 | 第29-33页 |
| 2.4 本章小结 | 第33-35页 |
| 第三章 松柏醇高效转化体系的构建 | 第35-45页 |
| 3.1 前言 | 第35-36页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 基因、质粒和菌株 | 第36-37页 |
| 3.2.2 过氧化氢抑制分析 | 第37页 |
| 3.2.3 基因表达 | 第37-38页 |
| 3.2.4 酶活性分析 | 第38页 |
| 3.2.5 松柏醇合成条件优化 | 第38页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第38-43页 |
| 3.3.1 过氧化氢对PsVAO的抑制及松柏醇的过度氧化作用 | 第38-39页 |
| 3.3.2 过氧化氢酶的表达与分析 | 第39-40页 |
| 3.3.3 强化过氧化氢酶活性的松柏醇合成体系的构建与分析 | 第40-41页 |
| 3.3.4 条件优化及3-L发酵罐发酵 | 第41-43页 |
| 3.4 本章小结 | 第43-45页 |
| 第四章 代谢工程改造解脂亚洛酵母合成黄杉素 | 第45-62页 |
| 4.1 前言 | 第45页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第45-53页 |
| 4.2.1 菌株、质粒和培养条件 | 第45-46页 |
| 4.2.2 分子生物学技术 | 第46-50页 |
| 4.2.3 菌株构建 | 第50-52页 |
| 4.2.4 发酵条件优化 | 第52页 |
| 4.2.5 分析方法 | 第52-53页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第53-61页 |
| 4.3.1 黄杉素合成途径在解脂亚洛酵母酵母中的重构 | 第53-56页 |
| 4.3.2 黄杉素合成途径限速步骤分析与模块化优化 | 第56-57页 |
| 4.3.3 通过强化前体代谢流提高黄杉素合成效率 | 第57-59页 |
| 4.3.4 发酵条件优化 | 第59-61页 |
| 4.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第五章 通过脂肪酸动态调控提高解脂亚洛酵母黄杉素合成 | 第62-80页 |
| 5.1 前言 | 第62-63页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第63-71页 |
| 5.2.1 菌株与质粒 | 第63页 |
| 5.2.2 分子生物学 | 第63-69页 |
| 5.2.3 随机和定点整合方法 | 第69-70页 |
| 5.2.4 qRT-PCR | 第70-71页 |
| 5.2.5 分析方法 | 第71页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第71-78页 |
| 5.3.1 随机和定点整合方法的构建 | 第71-74页 |
| 5.3.2 脂肪酸诱导型启动子分析 | 第74-75页 |
| 5.3.3 gRNA单靶点阻遏效果分析 | 第75-76页 |
| 5.3.4 多基因组合阻遏效果分析 | 第76-77页 |
| 5.3.5 脂肪酸合成动态调控下黄杉素与脂肪酸合成 | 第77-78页 |
| 5.4 本章小结 | 第78-80页 |
| 第六章 水飞蓟宾转化体系的构建与初步优化 | 第80-94页 |
| 6.1 前言 | 第80-81页 |
| 6.2 实验材料与方法 | 第81-84页 |
| 6.2.1 化学试剂 | 第81页 |
| 6.2.2 基因、质粒和菌株 | 第81页 |
| 6.2.3 体内酶级联的构建 | 第81-83页 |
| 6.2.4 过氧化物酶的表达与纯化 | 第83页 |
| 6.2.5 过氧化物酶活性分析 | 第83页 |
| 6.2.6 水飞蓟宾合成反应过程的优化 | 第83-84页 |
| 6.2.7 分析方法 | 第84页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第84-92页 |
| 6.3.1 过氧化物酶的选择及其水飞蓟宾合成功能的分析 | 第84-87页 |
| 6.3.2 酶级联的设计与构建 | 第87-88页 |
| 6.3.3 血红素强化 | 第88-89页 |
| 6.3.4 反应条件的优化 | 第89-92页 |
| 6.4 本章小结 | 第92-94页 |
| 主要结论与展望 | 第94-96页 |
| 论文主要创新点 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-110页 |
| 附录 Ⅰ:作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第110-111页 |
| 附录 Ⅱ：所构建的工具载体序列 | 第111-117页 |
