摘要 | 第8-11页 |
ABSTRACT | 第11-13页 |
缩略语表(ABBREVIATION) | 第14-17页 |
第1章 文献综述 | 第17-41页 |
1.1 塞内卡谷病毒( Seneca valley virus, SVV)研究进展 | 第17-27页 |
1.1.1 塞内卡谷病毒分子生物学特征 | 第17-21页 |
1.1.2 塞内卡谷病毒感染宿主 | 第21-22页 |
1.1.3 塞内卡谷病毒流行现状 | 第22-24页 |
1.1.4 塞内卡谷病毒发病机制 | 第24-25页 |
1.1.5 塞内卡谷病毒的鉴别诊断 | 第25-26页 |
1.1.6 预防和控制管理 | 第26-27页 |
1.2 RIG-I样受体(RIG-I-like receptors, RLRs)介导的抗病毒信号转导 | 第27-41页 |
1.2.1 RLRs成员及其功能 | 第29-31页 |
1.2.2 RLRs介导的信号转导 | 第31-36页 |
1.2.3 MDA5特异性识别小RNA病毒核酸 | 第36-37页 |
1.2.4 小RNA病毒与宿主抗病毒天然免疫反应的相互作用 | 第37-41页 |
第2章 研究目的与意义 | 第41-42页 |
第3章 材料与方法 | 第42-56页 |
3.1 实验材料 | 第42-45页 |
3.1.1 工程菌、细胞和病毒 | 第42页 |
3.1.2 克隆载体和表达质粒 | 第42页 |
3.1.3 主要药品和试剂 | 第42-43页 |
3.1.4 主要培养液及其配制 | 第43-44页 |
3.1.5 主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第44-45页 |
3.2 实验方法 | 第45-56页 |
3.2.1 病料的采集、处理与检测 | 第45页 |
3.2.2 病毒的分离鉴定 | 第45-46页 |
3.2.3 病毒的增殖 | 第46页 |
3.2.4 病毒噬斑实验 | 第46-47页 |
3.2.5 病毒粒子电镜观察 | 第47页 |
3.2.6 SVV全长cDNA克隆构建 | 第47页 |
3.2.7 rSVV的拯救 | 第47-48页 |
3.2.8 病毒生长曲线的绘制 | 第48页 |
3.2.9 SVV病毒蛋白表达质粒的建立 | 第48页 |
3.2.10 3C、MAVS、TRIF和TANK氨基酸点突变体的建立 | 第48页 |
3.2.11 制性内切酶酶切反应 | 第48-49页 |
3.2.12 DNA凝胶电泳与纯化回收 | 第49页 |
3.2.13 PCR或酶切产物回收与纯化 | 第49页 |
3.2.14 DNA片段与质粒载体的连接 | 第49页 |
3.2.15 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第49-50页 |
3.2.16 连接产物的转化 | 第50页 |
3.2.17 质粒DNA的小量制备 | 第50页 |
3.2.18 细胞的传代 | 第50-51页 |
3.2.19 瞬时转染 | 第51页 |
3.2.20 免疫共沉淀实验 | 第51页 |
3.2.21 免疫印迹实验 | 第51-52页 |
3.2.22 免疫荧光与激光共聚焦显微镜观察 | 第52-53页 |
3.2.23 实时荧光定量PCR检测 | 第53-54页 |
3.2.24 双荧光素酶报告基因实验 | 第54-55页 |
3.2.25 药物处理 | 第55页 |
3.2.26 统计学方法 | 第55-56页 |
第4章 结果与分析 | 第56-84页 |
4.1 塞内卡谷病毒(SVV)的分离鉴定 | 第56-60页 |
4.1.1 疑似SVV感染病料样品的检测 | 第56-57页 |
4.1.2 病料样品的病毒分离鉴定 | 第57页 |
4.1.3 SVV电镜观察 | 第57-58页 |
4.1.4 SVVHB-CH-2016全基因组序列测定与分析 | 第58-60页 |
4.2 SVV感染性病毒粒子的拯救 | 第60-63页 |
4.2.1 SVV全基因组cDNA的拼接 | 第60-61页 |
4.2.2 SVV感染性病毒粒子(rSVV)的拯救 | 第61-62页 |
4.2.3 rSVV的生长曲线测定 | 第62-63页 |
4.3 塞内卡谷病毒拮抗宿主Ⅰ型干扰素产生的分子机制研究 | 第63-84页 |
4.3.1 SVV感染不能激活Ⅰ型干扰素的产生 | 第63-66页 |
4.3.2 SVV3C~(pro)抑制Sev诱导IFN-β的产生 | 第66-68页 |
4.3.3 SVV3C~(pro)靶向MAVS,TRIF和TANK来拮抗Sev诱导的Ⅰ型干扰素产生 | 第68-71页 |
4.3.4 SVV3C~(pro)介导的MAVS,TRIF和TANK的切割取决于其蛋白酶活性 | 第71-73页 |
4.3.5 SVV3C~(pro)与MAVS,TRIF和TANK互作 | 第73-75页 |
4.3.6 SVV3C~(pro)在特定位点切割MAVS,TRIF和TANK | 第75-78页 |
4.3.7 MAVS,TRIF和TANK的切割片段失去其诱导Ⅰ型干扰素产生的功能 | 第78-81页 |
4.3.8 SVV3C~(pro)介导的TANK切割促进TRAF6触发的NF-κB活化 | 第81-84页 |
第5章 讨论与结论 | 第84-90页 |
5.1 讨论 | 第84-89页 |
5.1.1 SVV的分子特性 | 第84-85页 |
5.1.2 CMV启动子驱动的SVV感染性克隆的建立 | 第85-87页 |
5.1.3 SVV拮抗宿主Ⅰ型干扰素产生的分子机制研究 | 第87-89页 |
5.2 结论 | 第89-90页 |
参考文献 | 第90-104页 |
附录 | 第104-109页 |
个人资料 | 第109页 |
发表论文 | 第109-110页 |
致谢 | 第110-111页 |