| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语 | 第11-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-37页 |
| 1.1 异腈类天然产物的分离及其生物合成的初步研究 | 第13-20页 |
| 1.2 异腈合成酶的研究 | 第20-28页 |
| 1.2.1 异腈合成酶IsnA和IsnB的发现 | 第20-25页 |
| 1.2.2 Paerucumarin的生物合成研究 | 第25页 |
| 1.2.3 Welwitindolinone的生物合成研究 | 第25-26页 |
| 1.2.4 Ambiguine的生物合成研究 | 第26-28页 |
| 1.3 微生物源可结合铜离子的天然产物 | 第28-35页 |
| 1.3.1 Methanobactin | 第28-32页 |
| 1.3.2 Staphylopine | 第32-33页 |
| 1.3.3 Yersiniabactin | 第33页 |
| 1.3.4 Closthioamide | 第33-34页 |
| 1.3.5 Bleomycin | 第34-35页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第35-37页 |
| 第二章 材料与方法 | 第37-58页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-47页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第37-39页 |
| 2.1.2 引物序列 | 第39-42页 |
| 2.1.3 培养基 | 第42-43页 |
| 2.1.4 生化试剂 | 第43-46页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第46-47页 |
| 2.2 实验方法 | 第47-58页 |
| 2.2.1 菌种培养及保藏 | 第47页 |
| 2.2.2 醋酸钾法抽提链霉菌总DNA | 第47-48页 |
| 2.2.3 通过PCR扩增目的基因片段 | 第48页 |
| 2.2.4 DNA片段回收 | 第48-49页 |
| 2.2.5 醋酸钠纯化DNA | 第49页 |
| 2.2.6 酶连反应 | 第49页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态细胞制备及DNA转化 | 第49-50页 |
| 2.2.8 大肠杆菌质粒的小量抽提 | 第50页 |
| 2.2.9 大肠杆菌和链霉菌的两亲本属间接合转移 | 第50页 |
| 2.2.10 变铅青链霉菌的原生质体转化 | 第50-51页 |
| 2.2.11 PCR-targeting重组法 | 第51页 |
| 2.2.12 蛋白质的诱导表达 | 第51-52页 |
| 2.2.13 蛋白质的分离纯化 | 第52页 |
| 2.2.14 发酵和化合物检测 | 第52-53页 |
| 2.2.15 化合物的分离和结构鉴定 | 第53页 |
| 2.2.16 螯合物的检测 | 第53-54页 |
| 2.2.17 金属对化合物生物活性测定的影响 | 第54页 |
| 2.2.18 生物信息学分析 | 第54页 |
| 2.2.19 非核糖体多肽合成酶中A结构域的底物选择性分析(Maruyama et al 2016) | 第54-55页 |
| 2.2.20 ICP-MS方法 | 第55-56页 |
| 2.2.21 铬铅青（CSA）显色方法 | 第56页 |
| 2.2.22 SF2768在细胞外/细胞内产生比例检测方法 | 第56-58页 |
| 第三章 双异腈化合物SF2768生物合成的研究 | 第58-83页 |
| 3.1 前言 | 第58页 |
| 3.2 结果与分析 | 第58-79页 |
| 3.2.1 抑菌活性物质SF2768的发酵、分离和纯化 | 第58-65页 |
| 3.2.2 SF2768生物合成相关基因的确定 | 第65-69页 |
| 3.2.3 SF2768类似物的发现及分离纯化 | 第69-70页 |
| 3.2.4 SF2768及其类似物生理生化性质的测定 | 第70-73页 |
| 3.2.5 sfa基因簇的生物信息学分析 | 第73-75页 |
| 3.2.6 Sfa D的底物特异性检测 | 第75-77页 |
| 3.2.7 SF2768生物合成途径的分析 | 第77-79页 |
| 3.3 讨论 | 第79-83页 |
| 3.3.1 异腈合成酶的研究 | 第79-80页 |
| 3.3.2 Red结构域催化的4电子还原反应 | 第80-83页 |
| 第四章 铜载体SF2768的功能验证 | 第83-93页 |
| 4.1 前言 | 第83页 |
| 4.2 结果与分析 | 第83-91页 |
| 4.2.1 通过LC-MS检测化合物与铜离子的复合物 | 第83-85页 |
| 4.2.2 化合物结合金属离子类型的检测 | 第85-86页 |
| 4.2.3 利用CAS检测金属螯合物 | 第86页 |
| 4.2.4 利用滴定实验检测化合物与铜离子的相互作用 | 第86-87页 |
| 4.2.5 SF2768铜载体功能的验证 | 第87-88页 |
| 4.2.6 SF2768铜载体摄入元件的功能验证 | 第88-91页 |
| 4.2.7 铜离子可解除化合物的抑菌作用 | 第91页 |
| 4.3 讨论 | 第91-93页 |
| 4.3.1 SF2768的生物学功能 | 第92-93页 |
| 第五章 总结与展望 | 第93-95页 |
| 5.1 总结 | 第93-94页 |
| 5.2 展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-102页 |
| 附录 | 第102-123页 |
| 博士期间发表文章 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
