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基于核糖体序列的眼点淀粉卵甲藻和刺激隐核虫的分类学分析与检测

中文摘要第8-9页
Abstract第9-10页
第一章 文献综述第11-29页
    1.1 大黄鱼主要寄生虫病介绍第11-13页
    1.2 眼点淀粉卵甲藻病研究概况第13-19页
        1.2.1 眼点淀粉卵甲藻的命名和分类地位的确定第13-17页
        1.2.2 眼点淀粉卵甲藻的分布第17页
        1.2.3 眼点淀粉卵甲藻的生活史第17-18页
        1.2.4 眼点淀粉卵甲藻对海水鱼的危害第18-19页
    1.3 刺激隐核虫研究概况第19-24页
        1.3.1 刺激隐核虫命名和分类地位第19-21页
        1.3.2 刺激隐核虫的分布第21页
        1.3.3 刺激隐核虫的生活史第21-23页
        1.3.4 刺激隐核虫对海水鱼的危害第23-24页
        1.3.5 刺激隐核虫的检测第24页
    1.4 基于核糖体序列的鱼类寄生虫分类学研究进展第24-27页
    1.5 本研究的的内容和意义第27-29页
第二章 眼点淀粉卵甲藻培养和生活史观察第29-53页
    2.1 材料第29页
    2.2 方法第29-33页
        2.2.1 眼点淀粉卵甲藻的采集第29页
        2.2.2 眼点淀粉卵甲藻胞囊发育的观察第29-31页
        2.2.3 眼点淀粉卵甲藻涡孢子观察第31-33页
        2.2.4 眼点淀粉卵甲藻营养体的离体保存第33页
    2.3 结果与分析第33-49页
        2.3.1 眼点淀粉卵甲藻的获取第33-35页
        2.3.2 眼点淀粉卵甲藻胞囊的观察第35-40页
        2.3.3 眼点淀粉卵甲藻涡孢子观察结果第40-46页
        2.3.4 眼点淀粉卵甲藻短期保存效果第46-49页
    2.4 讨论第49-53页
第三章 眼点淀粉卵甲藻对大黄鱼的感染力测定第53-67页
    3.1 材料第53页
    3.2 方法第53-56页
        3.2.1 三种体重大黄鱼鳃部成熟胞囊大小的测定第53页
        3.2.2 培养眼点淀粉卵甲藻过程中,投放涡孢子数量的优化第53-54页
        3.2.3 眼点淀粉卵甲藻致死量的测定第54-55页
        3.2.4 眼点淀粉卵甲藻涡孢子感染大黄鱼并发育成胞囊比例估测第55页
        3.2.5 涡孢子半数致死量测定第55-56页
    3.3 结果第56-63页
        3.3.1 鳃部成熟胞囊大小的测定情况第56页
        3.3.2 眼点淀粉卵甲藻培养条件的优化第56-58页
        3.3.3 眼点淀粉卵甲藻致死量的测定第58-59页
        3.3.4 眼点淀粉卵甲藻涡孢子成功感染大黄鱼并发育成胞囊的比例估测第59-61页
        3.3.5 涡孢子对大黄鱼的半数致死量第61-63页
    3.4 讨论第63-67页
第四章 眼点淀粉卵甲藻核糖体序列的拼接和序列分析第67-89页
    4.1 材料第67-68页
        4.1.1 虫株来源和实验动物第67页
        4.1.2 主要试剂与仪器第67-68页
    4.2 方法第68-74页
        4.2.1 ND1410拼接所用引物第68页
        4.2.2 眼点淀粉卵甲藻的采集第68页
        4.2.3 眼点淀粉卵甲藻RNA的提取第68-69页
        4.2.4 眼点淀粉卵甲藻DNA提取第69-70页
        4.2.5 28S基因片段序列的扩增第70页
        4.2.6 18S序列PCR扩增、克隆及测序分析第70-71页
        4.2.7 ITS序列PCR扩增、克隆及测序分析第71页
        4.2.8 28S序列PCR扩增、克隆、验证及测序分析第71-72页
        4.2.9 28S序列的验证第72页
        4.2.10 眼点淀粉卵甲藻ND1412株部分18S、28S基因片段两翼的拼接第72-74页
    4.3 结果第74-86页
        4.3.1 18S基因片段序列测序分析第74-77页
        4.3.2 ITS序列测序分析第77-78页
        4.3.3 28S基因片段序列测序分析第78-81页
        4.3.4 完整眼点淀粉卵甲藻完整18S、28S拼接结果第81-83页
        4.3.5 眼点淀粉卵甲藻18S序列分析第83-85页
        4.3.6 眼点淀粉卵甲藻28S序列分析第85-86页
    4.4 讨论第86-89页
第五章 眼点淀粉卵甲藻PCR检测方法的建立第89-99页
    5.1 材料第89-90页
        5.1.1 虫株来源和实验动物第89页
        5.1.2 主要试剂与仪器第89-90页
    5.2 方法第90-92页
        5.2.1 检测过程中所用引物第90页
        5.2.2 眼点淀粉卵甲藻的检测第90-91页
        5.2.3 3种引物物种特异性分析第91-92页
    5.3 结果第92-98页
        5.3.1 眼点淀粉卵甲藻的检测结果第92-97页
        5.3.2 引物物种特异性情况第97-98页
    5.4 讨论第98-99页
第六章 刺激隐核虫核糖体序列的拼接和序列分析第99-123页
    6.1 材料与方法第99-104页
        6.1.1 虫株来源第99页
        6.1.2 主要试剂第99-100页
        6.1.3 实验所用引物第100-101页
        6.1.4 刺激隐核虫生活史的观察第101页
        6.1.5 刺激隐核虫的传代培养第101页
        6.1.6 刺激隐核虫采集与核酸的提取第101-102页
        6.1.7 rDNA基因序列的扩增第102页
        6.1.8 RNA的提取28S基因小片段序列的获取第102页
        6.1.9 28S部分序列PCR扩增及测序第102-103页
        6.1.10 18S部分序列PCR扩增及测序第103页
        6.1.11 ITS1/5.8S/ITS2序列PCR扩增及测序第103-104页
        6.1.12 ISG序列PCR扩增第104页
        6.1.13 四株虫株部分ISG区域扩增第104页
    6.2 结果第104-119页
        6.2.1 刺激隐核虫采集及生活史观察、传代第104-106页
        6.2.2 18S基因片段序列测序分析第106页
        6.2.3 28S基因片段序列测序分析第106-108页
        6.2.4 18S/ITS1/5. 8S/ITS2/28S序列PCR扩增及测序第108页
        6.2.5 28S/IGS/18S序列PCR扩增及测序第108-109页
        6.2.6 ND1410株 18S基因序列分析第109-114页
        6.2.7 ND1410株 ITS1/5.8S/ITS2基因序列分析第114页
        6.2.8 ND1410株28S基因序列分析第114-119页
        6.2.9 四株虫株亲缘关系分析第119页
    6.3 讨论第119-123页
第七章 刺激隐核虫虫检测方法的建立第123-131页
    7.1 材料与方法第123-126页
        7.1.1 虫株来源和实验动物第123页
        7.1.2 主要试剂与仪器第123-124页
        7.1.3 实验所用引物第124页
        7.1.4 特异性引物的设计第124-125页
        7.1.5 PCR检测第125-126页
    7.2 结果第126-129页
        7.2.1 4个刺激隐核虫虫株的检测结果第126页
        7.2.2 PCR检测灵敏度测定结果第126-129页
        7.2.3 PCR检测特异性测定结果第129页
    7.3 讨论第129-131页
全文总结第131-132页
附录第132-136页
参考文献第136-142页
致谢第142页

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