| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第14-38页 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 | 第14页 |
| 1.2 胰腺癌耐药机制研究进展 | 第14-19页 |
| 1.3 上皮间质转化,肿瘤干细胞与肿瘤细胞耐药 | 第19-29页 |
| 1.3.1 上皮间质转化 | 第20-23页 |
| 1.3.2 肿瘤干细胞 | 第23-27页 |
| 1.3.3 上皮间质转化,肿瘤干细胞与肿瘤细胞耐药 | 第27-29页 |
| 1.4 长链非编码RNA对EMT和CSCS的调控 | 第29-35页 |
| 1.4.1 长链非编码RNA对EMT和CSCs调控的研究进展 | 第29-32页 |
| 1.4.2 长链非编码RNA的主要作用机制 | 第32-35页 |
| 1.5 本文的主要研究内容 | 第35-38页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第35-36页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第36-38页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第38-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第38-44页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第38页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第38页 |
| 2.1.3 菌株 | 第38-39页 |
| 2.1.4 载体 | 第39页 |
| 2.1.5 引物及siRNA序列 | 第39-41页 |
| 2.1.6 LncRNA表达谱芯片 | 第41页 |
| 2.1.7 病人组织样本 | 第41-42页 |
| 2.1.8 抗体 | 第42页 |
| 2.1.9 各类其它实验试剂 | 第42-43页 |
| 2.1.10 实验仪器 | 第43页 |
| 2.1.11 主要网站和软件 | 第43-44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-52页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第44页 |
| 2.2.2 胰腺癌耐药细胞株的建立 | 第44-45页 |
| 2.2.3 MTT实验 | 第45页 |
| 2.2.4 核酸的提取 | 第45-47页 |
| 2.2.5 实时定量PCR | 第47页 |
| 2.2.6 免疫印迹实验 | 第47页 |
| 2.2.7 Transwell实验 | 第47-48页 |
| 2.2.8 成球实验 | 第48页 |
| 2.2.9 克隆形成实验 | 第48页 |
| 2.2.10 LncRNA芯片分析 | 第48页 |
| 2.2.11 裸鼠成瘤实验 | 第48-49页 |
| 2.2.12 表达载体构建 | 第49页 |
| 2.2.13 双荧光素酶报告系统 | 第49-50页 |
| 2.2.14 核质分离实验 | 第50-51页 |
| 2.2.15 细胞划痕实验 | 第51页 |
| 2.2.16 统计学处理 | 第51-52页 |
| 第3章 胰腺癌耐药细胞株的建立 | 第52-68页 |
| 3.1 引言 | 第52页 |
| 3.2 胰腺癌耐药细胞株BxPC-3-Gem的建立 | 第52-55页 |
| 3.3 胰腺癌耐药细胞EMT特性分析 | 第55-59页 |
| 3.3.1 胰腺癌耐药细胞EMT相关基因的表达分析 | 第55-57页 |
| 3.3.2 胰腺癌耐药细胞迁移与侵袭能力分析 | 第57-59页 |
| 3.4 胰腺癌耐药细胞CSC特征分析 | 第59-66页 |
| 3.4.1 胰腺癌耐药细胞CSCs相关基因的表达分析 | 第59-61页 |
| 3.4.2 胰腺癌耐药细胞CSC表型分析 | 第61-66页 |
| 3.5 本章小结 | 第66-68页 |
| 第4章 Linc-DYNC2H1-4在胰腺癌耐药细胞及胰腺癌组织中的表达分析 | 第68-77页 |
| 4.1 引言 | 第68页 |
| 4.2 胰腺癌耐药细胞的lncRNA表达谱芯片分析 | 第68-70页 |
| 4.3 LncRNA的筛选 | 第70-75页 |
| 4.3.1 目标lncRNA的筛选 | 第70-71页 |
| 4.3.2 Linc-DYNC2H1-4在胰腺癌细胞中的表达分析 | 第71-72页 |
| 4.3.3 Linc-DYNC2H1-4在染色体上的位置及命名 | 第72-73页 |
| 4.3.4 Linc-DYNC2H1-4临近基因MMP3在胰腺癌细胞中的表达差异 | 第73-75页 |
| 4.4 本章小结 | 第75-77页 |
| 第5章 Linc-DYNC2H1-4促进胰腺癌细胞EMT及CSC能力的获得 | 第77-98页 |
| 5.1 引言 | 第77-78页 |
| 5.2 抑制linc-DYNC2H1-4表达对胰腺癌耐药细胞EMT与CSC特征的影响 | 第78-87页 |
| 5.2.1 抑制linc-DYNC2H1-4表达引起BxPC-3-Gem细胞EMT特性的降低 | 第78-81页 |
| 5.2.2 抑制linc-DYNC2H1-4表达引起BxPC-3-Gem细胞CSC特性的降低 | 第81-86页 |
| 5.2.3 抑制linc-DYNC2H1-4表达降低BxPC-3-Gem的MMP3表达水平 | 第86-87页 |
| 5.3 过表达linc-DYNC2H1-4引起胰腺癌敏感细胞EMT及CSC特性的增强 | 第87-96页 |
| 5.3.1 过表达linc-DYNC2H1-4引起BxPC-3细胞EMT特性增强 | 第87-90页 |
| 5.3.2 过表达linc-DYNC2H1-4引起BxPC-3细胞CSC特性增强 | 第90-95页 |
| 5.3.3 过表达linc-DYNC2H1-4提高BxPC-3细胞MMP3表达水平 | 第95-96页 |
| 5.4 本章小结 | 第96-98页 |
| 第6章 Linc-DYNC2H1-4促进胰腺癌CSC表型形成的分子机制 | 第98-120页 |
| 6.1 引言 | 第98页 |
| 6.2 Linc-DYNC2H1-4在细胞内的定位 | 第98-99页 |
| 6.3 Linc-DYNC2H1-4与miR-145结合 | 第99-105页 |
| 6.3.1 Linc-DYNC2H1-4与miR-145预测的结合位点 | 第99-102页 |
| 6.3.2 Linc-DYNC2H1-4的表达水平与miR-145呈现负相关 | 第102-105页 |
| 6.4 miR-145能够抑制EMT及CSCS的标志因子 | 第105-108页 |
| 6.4.1 miR-145能够抑制EMT及CSCs的标志因子 | 第105-106页 |
| 6.4.2 miR-145能够抑制MMP3的表达 | 第106-108页 |
| 6.5 Linc-DYNC2H1-4干预由miR-145过表达引起的靶基因下调及表型改变 | 第108-118页 |
| 6.6 本章小结 | 第118-120页 |
| 结论 | 第120-122页 |
| 参考文献 | 第122-140页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及其它成果 | 第140-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
| 个人简历 | 第143页 |
