| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 主要中英文缩略索引 | 第12-14页 |
| 第1章 前言 | 第14-18页 |
| 第2章 实验材料 | 第18-22页 |
| 2.1 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 2.2 菌株和细胞株 | 第19页 |
| 2.3 试剂及耗材 | 第19-22页 |
| 2.3.1 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.3.2 主要抗体 | 第20页 |
| 2.3.3 试剂盒 | 第20-22页 |
| 第3章 实验方法 | 第22-34页 |
| 3.1 CPSIT_P7重组菌的表达和纯化 | 第22-23页 |
| 3.1.1 CPSIT_P7重组蛋白的大规模表达 | 第22页 |
| 3.1.2 CPSIT_P7重组蛋白的纯化 | 第22-23页 |
| 3.1.3 BCA法测定CPSIT_P7重组蛋白浓度 | 第23页 |
| 3.2 CPSIT_P7纯化后超滤浓缩及去内毒素处理 | 第23-24页 |
| 3.2.1 CPSIT_P7纯化后超滤浓缩 | 第23页 |
| 3.2.2 CPSIT_P7去内毒素处理 | 第23-24页 |
| 3.3 THP-1细胞培养 | 第24页 |
| 3.4 CPSIT_P7重组蛋白刺激实验 | 第24-25页 |
| 3.5 提取细胞总蛋白 | 第25页 |
| 3.5.1 总蛋白的提取 | 第25页 |
| 3.5.2 蛋白浓度测定 | 第25页 |
| 3.6 Westernblotting | 第25-26页 |
| 3.6.1 SDS-PAGE胶的制备 | 第25-26页 |
| 3.6.2 Westernblotting操作步骤 | 第26页 |
| 3.7 RT-qPCR | 第26-29页 |
| 3.7.1 总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 3.7.2 cDNA的制备 | 第27-28页 |
| 3.7.3 引物设计 | 第28页 |
| 3.7.4 RT-qPCR检测 | 第28-29页 |
| 3.8 细胞因子阵列 | 第29页 |
| 3.9 瞬时转染与RNA干扰 | 第29-30页 |
| 3.10 pZERO-hTLR2、pZERO-hTLR6、pDeNy-hMal和pDeNy-hMyD88转化与转染 | 第30-31页 |
| 3.10.1 转化 | 第30页 |
| 3.10.2 细胞转染 | 第30-31页 |
| 3.11 ELISA | 第31-32页 |
| 3.12 NF-κB特异性抑制剂BAY11-7082抑制CPSIT_P7诱导炎症因子的表达 | 第32页 |
| 3.13 免疫荧光检测p65核转位 | 第32-33页 |
| 3.14 统计学分析 | 第33-34页 |
| 第4章 实验结果 | 第34-52页 |
| 4.1 重组蛋白CPSIT_P7的诱导表达 | 第34页 |
| 4.2 纯化重组蛋白CPSIT_p7 | 第34-35页 |
| 4.3 细胞因子阵列 | 第35-36页 |
| 4.4 重组蛋白CPSIT_P7诱导THP-1细胞表达IL-6mRNA | 第36-37页 |
| 4.5 重组蛋白CPSIT_P7诱导THP-1细胞表达IL-6 | 第37-39页 |
| 4.6 重组蛋白CPSIT_P7诱导THP-1细胞表达IL-8mRNA | 第39-40页 |
| 4.7 重组蛋白CPSIT_P7诱导THP-1细胞表达IL-8 | 第40-41页 |
| 4.8 重组蛋白CPSIT_P7诱导THP-1细胞表达MCP-1mRNA.. | 第41-42页 |
| 4.9 重组蛋白CPSIT_P7诱导THP-1细胞表达MCP-1 | 第42-43页 |
| 4.10 pDeNy-hMal阻断CPSIT_P7诱导THP-1细胞分泌IL-6、IL-8和MCP-1 | 第43-44页 |
| 4.11 pDeNy-hMyD88阻断CPSIT_P7诱导THP-1细胞分泌IL-6、IL-8和MCP-1 | 第44-45页 |
| 4.12 pDeNy-hMal下调pDeNy-hMyD88mRNA的表达 | 第45页 |
| 4.13 psiRNA-hTLR4和pZERO-hTLR6阻断诱导THP-1细胞表达IL-6、IL-8和MCP-1 | 第45-47页 |
| 4.14 重组蛋白CPSIT_P7刺激THP-1细胞后诱导IκBα磷酸化 | 第47页 |
| 4.15 NF-κB特异性抑制剂抑制CPSIT_P7诱导THP-1细胞表达IL-6、IL-8和MCP-1 | 第47-48页 |
| 4.16 NF-κB特异性抑制剂抑制CPSIT_P7诱导其磷酸化 | 第48-49页 |
| 4.17 重组蛋白CPSIT_P7刺激THP-1细胞后诱导NF-κBp65核转位 | 第49-52页 |
| 第5章 讨论 | 第52-56页 |
| 第6章 结论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 文献综述 | 第64-72页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 附录 | 第72-74页 |
| 硕士期间的科研成果 | 第74-75页 |
| 资助项目 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
