| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 缩略词表 | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 铜绿假单胞菌 | 第11-12页 |
| 1.2 铜绿假单胞菌的致病因子 | 第12-13页 |
| 1.2.1 细胞相关决定簇 | 第12页 |
| 1.2.2 分泌的毒力因子 | 第12-13页 |
| 1.3 铜绿假单胞菌的Ⅲ型分泌系统 | 第13-17页 |
| 1.3.1 Ⅲ型分泌系统的组成 | 第13-14页 |
| 1.3.2 通过ExsA途径调节T3SS | 第14-15页 |
| 1.3.3 通过Gac/Rsm系统调节T3SS | 第15-16页 |
| 1.3.4 T3SS的其他调节途径 | 第16-17页 |
| 1.4 CysB正调控PvdS | 第17-18页 |
| 1.5 CysB正调控PqsR | 第18-19页 |
| 1.6 研究意义及目的 | 第19-21页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第21-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-28页 |
| 2.1.1 实验菌株、质粒及引物 | 第21-26页 |
| 2.1.2 培养基及常见试剂的配置 | 第26-28页 |
| 2.1.3 实验仪器及常用试剂 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-37页 |
| 2.2.1 构建转座突变体文库 | 第28-29页 |
| 2.2.2 质粒的构建 | 第29页 |
| 2.2.3 铜绿假单胞菌中cysB突变体构建 | 第29-30页 |
| 2.2.4 CysB蛋白表达及纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.5 凝胶迁移实验(EMSA) | 第31-32页 |
| 2.2.6 化学发光筛选分析 | 第32页 |
| 2.2.7 蛋白免疫印迹分析(Westernblot) | 第32-33页 |
| 2.2.8 RNA提取和实时定量PCR | 第33-34页 |
| 2.2.9 RNA-seq及数据分析 | 第34页 |
| 2.2.10 CysB的晶体结构数据测定 | 第34-35页 |
| 2.2.11 CysB的晶体结构解析 | 第35页 |
| 2.2.12 建立小鼠急性肺炎感染模型及肺组织切片观察 | 第35-36页 |
| 2.2.13 cysB突变后对菌落形态,生物膜形成以及细菌运动性的影响 | 第36-37页 |
| 第三章 结果与分析 | 第37-53页 |
| 3.1 CysB正调控ExsA依赖性基因的表达 | 第37-39页 |
| 3.2 cysB突变降低了exsCEBA操纵子的表达水平 | 第39-41页 |
| 3.3 CysB影响细菌的生物膜形成,运动性以及菌落形态 | 第41-42页 |
| 3.4 RNA-seq数据分析 | 第42-44页 |
| 3.5 CysB影响铜绿假单胞菌的感染能力 | 第44-45页 |
| 3.6 CysB间接调控Ⅲ型分泌系统基因表达 | 第45-46页 |
| 3.7 CysB通过RetS调控Ⅲ型分泌系统基因表达 | 第46-49页 |
| 3.8 CysB通过Gac/Rsm途径影响Ⅲ型分泌系统基因表达 | 第49-50页 |
| 3.9 CysB蛋白晶体的衍射数据收集及结果分析 | 第50-51页 |
| 3.10 CysB的蛋白晶体结构以及对靶DNA识别的影响 | 第51-53页 |
| 讨论 | 第53-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 攻读硕士期间取得的科研成果 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
