摘要 | 第4-6页 |
ABSTRACT | 第6-7页 |
第一章 引言 | 第11-23页 |
1.1 Se与硒蛋白 | 第11-15页 |
1.2 生长板软骨及软骨细胞分化 | 第15-17页 |
1.3 Se,硒蛋白与生长板 | 第17-18页 |
1.4 内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress,ERS) | 第18-20页 |
1.5 研究目的与方案 | 第20-23页 |
第二章 研究材料与方法 | 第23-45页 |
2.1 研究材料 | 第23-27页 |
2.1.1 试验材料 | 第23页 |
2.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第23-26页 |
2.1.3 主要仪器设备 | 第26页 |
2.1.4 生物学软件 | 第26-27页 |
2.2 研究方法 | 第27-45页 |
2.2.1 细胞培养 | 第27页 |
2.2.2 细胞计数 | 第27-28页 |
2.2.3 复苏细胞 | 第28页 |
2.2.4 冻存细胞 | 第28页 |
2.2.5 阿辛蓝(Alcian)细胞染色 | 第28-29页 |
2.2.6 碱性磷酸酶(ALP)细胞染色 | 第29页 |
2.2.7 细胞活力测定 | 第29页 |
2.2.8 细胞周期测定 | 第29-30页 |
2.2.9 细胞死亡测定 | 第30-31页 |
2.2.10 细胞凋亡测定 | 第31页 |
2.2.11 胞浆线粒体蛋白抽提 | 第31-32页 |
2.2.12 琼脂糖凝胶电泳(DNA分离、纯化、鉴定) | 第32-33页 |
2.2.13 DNA凝胶回收 | 第33-34页 |
2.2.14 构建干扰Sel O的稳转ATDC5细胞系 | 第34-36页 |
2.2.15 实时定量聚合酶链锁反应(Quantitative real time polymera Se chain reaction,Q-PCR) | 第36-38页 |
2.2.16 免疫印迹(Western Blot, WB) | 第38-41页 |
2.2.17 离体组织培养 | 第41页 |
2.2.18 慢病毒体外感染 | 第41-42页 |
2.2.19 阿辛蓝(Alcian)组织染色 | 第42页 |
2.2.20 碱性磷酸酶(ALP)组织染色 | 第42-43页 |
2.2.21 小鼠胫骨HE染色 | 第43页 |
2.2.22 免疫组化(Immunohistochemistry, ICH) | 第43-44页 |
2.2.23 统计学分析 | 第44-45页 |
第三章 试验结果 | 第45-59页 |
3.1 Sel O在生长板软骨组织中的表达 | 第45-47页 |
3.2 Sel O在软骨细胞中的表达 | 第47-49页 |
3.3 干扰Sel O稳转细胞系的构建 | 第49-50页 |
3.4 体外小鼠胫骨培养 | 第50-52页 |
3.5 干扰Sel O对软骨细胞分化的影响 | 第52-56页 |
3.5.1 干扰Sel O对软骨细胞分化的影响 | 第52-53页 |
3.5.2 干扰Sel O对软骨细胞增殖的影响 | 第53-54页 |
3.5.3 干扰Sel O对软骨细胞凋亡的影响 | 第54-56页 |
3.6 干扰Sel O诱导软骨细胞凋亡的机制 | 第56-59页 |
3.6.1 干扰Sel O与软骨细胞氧化应激 | 第56-57页 |
3.6.2 干扰Sel O与软骨细胞内质网应激 | 第57-59页 |
第四章 讨论 | 第59-65页 |
4.1 Sel O在小鼠胫骨软骨表达 | 第59页 |
4.2 Sel O在ATDC5成软骨细胞的分化过程中表达 | 第59-60页 |
4.3 干扰Sel O导致软骨发育不良和生长板结构异常 | 第60页 |
4.4 Sel O调节软骨细胞分化 | 第60-63页 |
4.4.1 干扰Sel O抑制软骨细胞分化 | 第60-61页 |
4.4.2 干扰Sel O阻碍软骨细胞增殖 | 第61-62页 |
4.4.3 干扰Sel O诱导软骨细胞凋亡 | 第62-63页 |
4.5 Sel O对细胞氧化应激影响不明显 | 第63页 |
4.6 Sel O位于内质网参与内质网应激 | 第63-65页 |
参考文献 | 第65-71页 |
攻读硕士学位期间取得的研究成果(文章、会议、项目) | 第71-73页 |
致谢 | 第73-74页 |