| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第1章 前言 | 第16-41页 |
| 1.1 芳香族α-羟基酸 | 第16-19页 |
| 1.1.1 芳香族α-羟基酸的研究现状 | 第16-17页 |
| 1.1.2 芳香族α-羟基酸生物催化合成途径 | 第17-19页 |
| 1.2 腈水解酶 | 第19-38页 |
| 1.2.1 腈的生物合成与降解 | 第20页 |
| 1.2.2 腈水解酶的结构及作用机制 | 第20-22页 |
| 1.2.3 腈水解酶的来源和底物特异性 | 第22-24页 |
| 1.2.4 腈水解酶在有机合成中的应用 | 第24-32页 |
| 1.2.5 腈水解酶应用扩展及最新研究进展 | 第32-38页 |
| 1.3 本课题的研究目的及意义 | 第38-39页 |
| 1.4 本课题的主要研究内容 | 第39-41页 |
| 第2章 材料与方法 | 第41-53页 |
| 2.1 材料 | 第41-43页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第41页 |
| 2.1.2 分子生物学工具酶与试剂盒 | 第41页 |
| 2.1.3 试剂 | 第41-42页 |
| 2.1.4 主要设备 | 第42页 |
| 2.1.5 培养基 | 第42-43页 |
| 2.2 方法 | 第43-52页 |
| 2.2.1 质粒提取 | 第43页 |
| 2.2.2 DNA凝胶回收 | 第43页 |
| 2.2.3 DNA产物纯化 | 第43页 |
| 2.2.4 基因组DNA提取 | 第43页 |
| 2.2.5 PCR扩增条件 | 第43-45页 |
| 2.2.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第45页 |
| 2.2.7 TA克隆 | 第45页 |
| 2.2.8 酶切 | 第45页 |
| 2.2.9 DNA连接 | 第45-46页 |
| 2.2.10 感受态细胞制备 | 第46页 |
| 2.2.11 转化 | 第46页 |
| 2.2.12 菌种保存 | 第46页 |
| 2.2.13 重组腈水解酶基因的表达 | 第46页 |
| 2.2.14 腈水解酶的纯化 | 第46页 |
| 2.2.15 腈水解酶的浓缩与除盐 | 第46-47页 |
| 2.2.16 蛋白浓度测定 | 第47页 |
| 2.2.17 比色法检测铵离子浓度 | 第47页 |
| 2.2.18 TLC薄层层析法分析条件的建立 | 第47-48页 |
| 2.2.19 HPLC分析方法的建立 | 第48-52页 |
| 2.3 本章小结 | 第52-53页 |
| 第3章 扁桃腈腈水解酶的挖掘 | 第53-64页 |
| 3.1 前言 | 第53-54页 |
| 3.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 3.2.1 基于系统进化分析的扁桃腈腈水解酶的基因挖掘 | 第54页 |
| 3.2.2 腈水解酶基因的克隆表达 | 第54页 |
| 3.2.3 腈水解酶基因的纯化与浓缩 | 第54页 |
| 3.2.4 SDS-PAGE电泳 | 第54-55页 |
| 3.2.5 蛋白浓度定量 | 第55页 |
| 3.2.6 扁桃腈水解活性检测 | 第55页 |
| 3.2.7 BCJ2315与来源于Alcaligenes faecalis ATCC8750腈水解酶活力比较 | 第55-56页 |
| 3.3 结果与分析 | 第56-62页 |
| 3.3.1 基于系统进化分析的扁桃腈腈水解酶的聚类 | 第56-58页 |
| 3.3.2 腈水解酶的克隆、表达、纯化与浓缩 | 第58-59页 |
| 3.3.3 扁桃腈水解活性检测 | 第59-60页 |
| 3.3.4 BCJ2315与来源于Alcaligenes faecalis ATCC8750腈水解酶活力比较 | 第60-62页 |
| 3.4 本章小结 | 第62-64页 |
| 第4章 BCJ2315酶学性质研究 | 第64-73页 |
| 4.1 前言 | 第64页 |
| 4.2 实验部分 | 第64-65页 |
| 4.2.1 BCJ2315分子量测定 | 第64页 |
| 4.2.2 pH、温度对BCJ2315的影响 | 第64页 |
| 4.2.3 底物谱测定 | 第64-65页 |
| 4.2.4 反应动力学参数测定 | 第65页 |
| 4.2.5 金属离子对酶活的影响 | 第65页 |
| 4.2.6 有机溶剂对酶活的影响 | 第65页 |
| 4.3 结果与分析 | 第65-71页 |
| 4.3.1 BCJ2315分子量测定 | 第65-66页 |
| 4.3.2 温度、pH对BCJ2315的影响 | 第66-67页 |
| 4.3.3 BCJ2315底物谱测定 | 第67-68页 |
| 4.3.4 反应动力学参数测定 | 第68-70页 |
| 4.3.5 金属离子对酶活的影响 | 第70-71页 |
| 4.3.6 有机溶剂对酶活的影响 | 第71页 |
| 4.4 本章小结 | 第71-73页 |
| 第5章 腈水解酶BCJ2315催化生产(R)-(-)-扁桃酸研究 | 第73-87页 |
| 5.1 前言 | 第73-74页 |
| 5.2 实验部分 | 第74-76页 |
| 5.2.1 温度、pH对重组菌M15/BCJ2315活力的影响 | 第74页 |
| 5.2.2 底物浓度对重组菌M15/BCJ2315活力的影响 | 第74页 |
| 5.2.3 产物浓度对重组菌M15/BCJ2315活力的影响 | 第74页 |
| 5.2.4 重组菌M15/BCJ2315重复使用批次 | 第74页 |
| 5.2.5 有机溶剂对重组菌M15/BCJ2315酶活的影响 | 第74-75页 |
| 5.2.6 重组菌M15/BCJ2315的发酵培养 | 第75页 |
| 5.2.7 两相法生产(R)-(-)-扁桃酸 | 第75页 |
| 5.2.8 分批补料生产(R)-(-)-扁桃酸 | 第75页 |
| 5.2.9 连续流加补料生产(R)-(-)-扁桃酸(300mL) | 第75页 |
| 5.2.10 连续流加补料生产(R)-(-)-扁桃酸(20L) | 第75-76页 |
| 5.3 结果与分析 | 第76-86页 |
| 5.3.1 温度、pH对重组菌M15/BCJ2315活力的影响 | 第76页 |
| 5.3.2 底物浓度对重组菌M15/BCJ2315活力的影响 | 第76-78页 |
| 5.3.3 产物浓度对重组菌M15/BCJ2315活力的影响 | 第78-79页 |
| 5.3.4 重组菌M15/BCJ2315重复使用批次 | 第79-80页 |
| 5.3.5 有机溶剂对重组菌M15/BCJ2315酶活的影响 | 第80-81页 |
| 5.3.6 重组菌M15/BCJ2315的发酵培养 | 第81页 |
| 5.3.7 两相法生产(R)-(-)-扁桃酸 | 第81-83页 |
| 5.3.8 分批补料生产(R)-(-)-扁桃酸 | 第83-84页 |
| 5.3.9 连续流加补料生产(R)-(-)-扁桃酸(300 mL) | 第84-85页 |
| 5.3.10 连续流加补料生产(R)-(-)-扁桃酸(20L) | 第85-86页 |
| 5.4 本章小结 | 第86-87页 |
| 第6章 腈水解酶催化生产(R)-(-)-邻氯扁桃酸研究 | 第87-105页 |
| 6.1 前言 | 第87页 |
| 6.2 实验部分 | 第87-89页 |
| 6.2.1 新型邻氯扁桃腈水解酶的挖掘 | 第87-88页 |
| 6.2.2 反应条件对重组菌M15/BCJ2315选择性的影响 | 第88-89页 |
| 6.2.3 BCJ2315的定向进化 | 第89页 |
| 6.3 结果与分析 | 第89-104页 |
| 6.3.1 新型邻氯扁桃腈水解酶的挖掘 | 第89-93页 |
| 6.3.2 反应条件对重组菌M15/BCJ2315选择性的影响 | 第93-98页 |
| 6.3.3 BCJ2315的定向进化 | 第98-104页 |
| 6.4 本章小结 | 第104-105页 |
| 第7章 结论与展望 | 第105-109页 |
| 7.1 结论 | 第105-107页 |
| 7.1.1 高活力和高对映体选择性扁桃腈腈水解酶的筛选 | 第105-106页 |
| 7.1.2 重组腈水解酶BCJ2315催化外消旋的扁桃腈制备(R)-(-)-扁桃酸 | 第106页 |
| 7.1.3 重组腈水解酶BCJ2315催化外消旋的邻氯扁桃腈制备(R)-(-)-邻氯扁桃酸 | 第106-107页 |
| 7.2 展望 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-121页 |
| 博士期间论文发表情况 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
