摘要 | 第7-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
缩略词 | 第10-11页 |
第一章 前言 | 第11-24页 |
1 糖蛋白(糖肽)研究概述 | 第11-13页 |
1.1 糖蛋白的定义及分布 | 第11页 |
1.2 糖蛋白的研究现状 | 第11-12页 |
1.3 近年来糖蛋白的免疫调节作用研究成果 | 第12-13页 |
1.3.1 动物类来源糖蛋白 | 第12页 |
1.3.2 植物类来源糖蛋白 | 第12-13页 |
1.3.3 真菌类来源糖蛋白 | 第13页 |
2 巨噬细胞概述 | 第13-16页 |
2.1 巨噬细胞的起源及发育分化 | 第13-14页 |
2.2 巨噬细胞的生物学功能 | 第14-16页 |
2.2.1 识别、清除病原体等抗原性异物 | 第15页 |
2.2.2 参与和促进炎症反应 | 第15页 |
2.2.3 对肿瘤细胞的杀伤作用 | 第15页 |
2.2.4 加工呈递抗原,启动特异性免疫应答 | 第15-16页 |
2.2.5 免疫调节作用 | 第16页 |
3 NF-κB信号通路概述 | 第16-21页 |
3.1 NF-κB家族成员 | 第16-18页 |
3.2 NF-κB的抑制性蛋白IκB | 第18页 |
3.3 IκB激酶复合物IKK | 第18-19页 |
3.4 NF-κB的信号转导的激活 | 第19-21页 |
4 本课题的立题背景、研究意义和主要研究内容 | 第21-24页 |
4.1 立题背景 | 第21-22页 |
4.2 研究目的及意义 | 第22页 |
4.3 主要研究内容(技术路线) | 第22页 |
4.4 创新之处 | 第22-24页 |
第二章 纳豆菌糖肽对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用 | 第24-35页 |
1 材料与仪器 | 第24-25页 |
1.1 材料 | 第24页 |
1.2 主要试剂 | 第24页 |
1.3 仪器 | 第24-25页 |
2 方法 | 第25-27页 |
2.1 细胞培养器皿的清洗与灭菌 | 第25页 |
2.1.1 玻璃器皿 | 第25页 |
2.1.2 塑料器皿/瓶盖 | 第25页 |
2.2 BNGP的制备方法 | 第25页 |
2.3 试剂配制方法 | 第25-26页 |
2.4 小鼠腹腔巨噬细胞的分离及培养方法 | 第26页 |
2.5 实验设计分组 | 第26页 |
2.6 噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞代谢活力 | 第26页 |
2.7 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红实验 | 第26页 |
2.8 小鼠腹腔巨噬细胞NO生成量测定 | 第26-27页 |
2.9 小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α 和PGE2的测定 | 第27页 |
2.10 数据处理 | 第27页 |
3 结果与分析 | 第27-32页 |
3.1 BNGP对小鼠腹腔巨噬细胞代谢活力的影响 | 第27-28页 |
3.2 BNGP对小鼠腹腔巨噬细胞中性红吞噬能力的影响 | 第28-29页 |
3.3 BNGP对小鼠腹腔巨噬细胞NO生成量的影响 | 第29-30页 |
3.4 BNGP对小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α 和PGE2的影响 | 第30-32页 |
4 讨论 | 第32-34页 |
5 小结 | 第34-35页 |
第三章 纳豆菌糖肽对RAW264.7 巨噬细胞的免疫调节作用 | 第35-49页 |
1 材料与试剂 | 第35-36页 |
1.1 材料 | 第35页 |
1.2 主要试剂 | 第35-36页 |
1.3 主要仪器设备 | 第36页 |
2 试验方法 | 第36-40页 |
2.1 试剂配制方法 | 第36页 |
2.2 细胞培养及试验分组 | 第36-37页 |
2.3 BNGP对巨噬细胞形态的影响 | 第37页 |
2.4 BNGP对巨噬细胞增殖的影响 | 第37页 |
2.5 BNGP对巨噬细胞吞噬能力的影响 | 第37-38页 |
2.6 BNGP对巨噬细胞分泌NO的影响 | 第38页 |
2.7 BNGP对巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α 和PGE2的影响 | 第38页 |
2.8 BNGP对巨噬细胞i NOS、COX-2 蛋白表达的影响 | 第38-39页 |
2.8.1 细胞总蛋白提取 | 第38页 |
2.8.2 SDS-PAGE电泳 | 第38-39页 |
2.8.3 转膜 | 第39页 |
2.8.4 免疫与杂交显色 | 第39页 |
2.9 统计学分析 | 第39-40页 |
3 结果与讨论 | 第40-47页 |
3.1 BNGP对巨噬细胞形态的影响 | 第40页 |
3.2 BNGP对巨噬细胞增殖的影响 | 第40-41页 |
3.3 BNGP对巨噬细胞吞噬能力的影响 | 第41-42页 |
3.4 BNGP对巨噬细胞分泌NO的影响 | 第42-43页 |
3.5 BNGP对巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α、PGE2的影响 | 第43-46页 |
3.6 BNGP对巨噬细胞i NOS和COX-2 蛋白表达的影响 | 第46-47页 |
4 讨论 | 第47-48页 |
5 小结 | 第48-49页 |
第四章 纳豆菌糖肽对巨噬细胞的免疫调节机理的研究 | 第49-62页 |
1 材料与仪器 | 第49-50页 |
1.1 材料 | 第49页 |
1.2 试剂 | 第49-50页 |
1.3 主要仪器设备 | 第50页 |
2 试验方法 | 第50-54页 |
2.1 BNGP对FITC-LPS结合细胞膜表面受体的竞争性抑制 | 第50-51页 |
2.1.1 试剂配制 | 第50页 |
2.1.2 细胞培养及分组处理方法 | 第50-51页 |
2.1.3 流式细胞术(Flow Cytometry)检测FITC-LPS荧光强度 | 第51页 |
2.2 BNGP对NF-κB核转位的调控(免疫荧光法) | 第51-52页 |
2.2.1 试剂配制 | 第51页 |
2.2.2 细胞培养与分组 | 第51页 |
2.2.3 免疫荧光观察NF-κB核转位 | 第51-52页 |
2.3 BNGP对NF-κB核转位的调控(免疫印迹法) | 第52-53页 |
2.3.1 试剂配制 | 第52页 |
2.3.2 细胞核、细胞质蛋白提取方法 | 第52页 |
2.3.2.1 细胞收集 | 第52页 |
2.3.2.2 细胞质中蛋白提取 | 第52页 |
2.3.2.3 细胞核中蛋白提取 | 第52页 |
2.3.3 SDS-PAGE电泳 | 第52-53页 |
2.3.3.1 上样蛋白准备 | 第52页 |
2.3.3.2 SDS-PAGE电泳 | 第52页 |
2.3.3.3 转膜 | 第52页 |
2.3.3.4 免疫与杂交显色 | 第52-53页 |
2.4 BNGP对IκB磷酸化的调控 | 第53-54页 |
2.4.1 试剂配制 | 第53页 |
2.4.2 细胞总蛋白提取 | 第53页 |
2.4.3 SDS-PAGE电泳 | 第53页 |
2.4.4 转膜 | 第53页 |
2.4.5 免疫与杂交显色 | 第53-54页 |
3 结果与分析 | 第54-60页 |
3.1 BNGP对FITC-LPS结合细胞膜表面受体的竞争性抑制 | 第54页 |
3.2 BNGP对NF-κB核转位的调控(免疫荧光法) | 第54-57页 |
3.3 BNGP对NF-κB核转位的调控(免疫印迹法) | 第57-59页 |
3.4 BNGP对IκB磷酸化的调控 | 第59-60页 |
4 讨论 | 第60-61页 |
5 小结 | 第61-62页 |
第五章 结论与展望 | 第62-64页 |
1 结论 | 第62页 |
1.1 BNGP对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用 | 第62页 |
1.2 BNGP对RAW264.7 巨噬细胞的免疫调节作用 | 第62页 |
1.3 BNGP对RAW264.7 巨噬细胞的免疫调节机理 | 第62页 |
2 展望 | 第62-64页 |
参考文献 | 第64-69页 |
致谢 | 第69-70页 |
攻读硕士研究生期间发表的论文 | 第70页 |