| 中文摘要 | 第4-7页 |
| abstract | 第7-10页 |
| 英文缩写词表 | 第16-18页 |
| 第1章 综述Ghrelin的研究进展及应用 | 第18-28页 |
| 1.1 Ghrelin的发现 | 第18-19页 |
| 1.2 Ghrelin及相关分子的结构组成 | 第19-22页 |
| 1.2.1 Ghrelin | 第19-20页 |
| 1.2.2 Ghrelin的辛酰化修饰及其关键酶 | 第20-21页 |
| 1.2.3 GHS-R | 第21-22页 |
| 1.3 Ghrelin的分布及调节 | 第22-23页 |
| 1.4 GHRL基因的单核苷酸多态性 | 第23-24页 |
| 1.5 Ghrelin的生理功能 | 第24-28页 |
| 1.5.1 Ghrelin与GH的释放 | 第24页 |
| 1.5.2 Ghrelin与摄食 | 第24-25页 |
| 1.5.3 Ghrelin与炎症反应 | 第25-26页 |
| 1.5.4 Ghrelin与糖代谢 | 第26页 |
| 1.5.5 Ghrelin与心血管系统 | 第26-28页 |
| 第2章 实验研究 | 第28-108页 |
| 第1节 Ghrelin对AngⅡ引起的细胞凋亡的保护作用 | 第28-52页 |
| 1.1 前言 | 第28-31页 |
| 1.2 实验材料 | 第31-33页 |
| 1.2.1 细胞株 | 第31页 |
| 1.2.2 试剂 | 第31-32页 |
| 1.2.3 主要仪器和设备 | 第32-33页 |
| 1.3 实验方法 | 第33-41页 |
| 1.3.1 细胞复苏及培养 | 第33页 |
| 1.3.2 细胞传代 | 第33页 |
| 1.3.3 MTT比色法检测细胞活性 | 第33-34页 |
| 1.3.4 流式细胞术检测AnnexinV-FITC/PI双染细胞凋亡 | 第34-35页 |
| 1.3.5 Bax,Bcl-2,Caspase-3,miR-122-5p,miR-208a-3p及miR-208b-5p的引物设计和合成 | 第35-36页 |
| 1.3.6 细胞总RNA提取及检测 | 第36-37页 |
| 1.3.7 逆转录 | 第37-38页 |
| 1.3.8 实时荧光定量PCR(real-timequantitivePCR,qPCR)检测 | 第38-39页 |
| 1.3.9 MiRNA/基因的mRNA相对表达量计算 | 第39页 |
| 1.3.10 Caspase-3活性检测 | 第39-41页 |
| 1.3.11 数据分析 | 第41页 |
| 1.4 实验结果 | 第41-49页 |
| 1.4.1 AngⅡ和ghrelin对细胞活性的影响 | 第41-43页 |
| 1.4.2 AngⅡ和ghrelin对细胞凋亡的影响 | 第43-45页 |
| 1.4.3 AngⅡ和ghrelin对凋亡关键分子的影响 | 第45-46页 |
| 1.4.4 AngⅡ和ghrelin对Caspase-3活性的影响 | 第46-47页 |
| 1.4.5 AngⅡ和ghrelin对miRNAs表达的影响 | 第47-49页 |
| 1.5 讨论 | 第49-50页 |
| 1.6 结论 | 第50-52页 |
| 第2节 MiR-122-5p及miR-208家族对细胞凋亡的影响 | 第52-82页 |
| 2.1 前言 | 第52-55页 |
| 2.2 实验材料 | 第55-57页 |
| 2.2.1 细胞株 | 第55页 |
| 2.2.2 试剂 | 第55-56页 |
| 2.2.3 主要仪器和设备 | 第56-57页 |
| 2.3 实验方法 | 第57-63页 |
| 2.3.1 细胞培养及传代 | 第57页 |
| 2.3.2 细胞转染 | 第57-59页 |
| 2.3.3 细胞总RNA提取及检测 | 第59-60页 |
| 2.3.4 逆转录 | 第60页 |
| 2.3.5 实时荧光定量PCR检测 | 第60页 |
| 2.3.6 MiRNA相对表达量计算 | 第60页 |
| 2.3.7 流式细胞术测定凋亡细胞百分比 | 第60页 |
| 2.3.8 RatApoptosisRT~2Profiler? PCR Array | 第60-63页 |
| 2.3.9 数据分析 | 第63页 |
| 2.4 结果 | 第63-77页 |
| 2.4.1 MiRNAsNC/mimics/inhibitor转染效果检测 | 第63-68页 |
| 2.4.2 MiR-122-5p/miR-208a-3p/miR-208b-5p对凋亡细胞百分比的影响 | 第68-72页 |
| 2.4.3 MiR-122-5p/miR-208a-3p/miR-208b-5p对凋亡通路及凋亡相关基因的影响 | 第72-77页 |
| 2.5 讨论 | 第77-80页 |
| 2.6 结论 | 第80-82页 |
| 第3节 MiR-122-5p靶基因的预测及验证 | 第82-100页 |
| 3.1 前言 | 第82-83页 |
| 3.2 实验材料 | 第83-85页 |
| 3.2.1 细胞 | 第83页 |
| 3.2.2 质粒载体 | 第83-84页 |
| 3.2.3 试剂 | 第84-85页 |
| 3.2.4 主要器材 | 第85页 |
| 3.3 实验方法 | 第85-95页 |
| 3.3.1 MiR-122-5p靶基因预测 | 第85页 |
| 3.3.2 细胞培养及传代 | 第85页 |
| 3.3.3 细胞转染 | 第85-86页 |
| 3.3.4 细胞总RNA提取、反转录 | 第86页 |
| 3.3.5 实时荧光定量PCR | 第86页 |
| 3.3.6 MiRNA/基因的mRNA相对表达量计算 | 第86页 |
| 3.3.7 细胞总蛋白提取 | 第86-87页 |
| 3.3.8 BCA法测定细胞总蛋白浓度 | 第87页 |
| 3.3.9 WesternBlot | 第87-89页 |
| 3.3.10 双荧光素酶报告基因载体构建 | 第89-94页 |
| 3.3.11 双荧光素酶报告基因检测系统 | 第94-95页 |
| 3.3.12 数据分析 | 第95页 |
| 3.4 结果 | 第95-97页 |
| 3.4.1 MiR-122-5p对Sesn2mRNA水平的影响 | 第95-96页 |
| 3.4.2 MiR-122-5p对SESN2蛋白水平的影响 | 第96页 |
| 3.4.3 双荧光素酶报告系统检测miR-122-5p和Sesn2的靶标关系 | 第96-97页 |
| 3.5 讨论 | 第97-98页 |
| 3.6 结论 | 第98-100页 |
| 第4节 Sestrin-2基因对细胞凋亡的影响 | 第100-108页 |
| 4.1 前言 | 第100页 |
| 4.2 实验材料 | 第100-101页 |
| 4.2.1 细胞 | 第100页 |
| 4.2.2 质粒载体 | 第100-101页 |
| 4.2.3 试剂 | 第101页 |
| 4.2.4 主要器材 | 第101页 |
| 4.3 实验方法 | 第101-103页 |
| 4.3.1 pEX-Sesn2过表达载体构建 | 第101-102页 |
| 4.3.2 细胞培养及传代 | 第102页 |
| 4.3.3 细胞转染 | 第102页 |
| 4.3.4 细胞总RNA提取、反转录 | 第102-103页 |
| 4.3.5 实时荧光定量PCR | 第103页 |
| 4.3.6 MiRNA/基因的mRNA相对表达量计算 | 第103页 |
| 4.3.7 细胞总蛋白提取 | 第103页 |
| 4.3.8 BCA法测定细胞总蛋白浓度 | 第103页 |
| 4.3.9 WesternBlot | 第103页 |
| 4.3.10 流式细胞术测定凋亡细胞百分比 | 第103页 |
| 4.3.11 数据分析 | 第103页 |
| 4.4 结果 | 第103-107页 |
| 4.4.1 AngⅡ及ghrelin对Sesn2表达的影响 | 第103-104页 |
| 4.4.2 pEX-Sesn2过表达载体转染效率检测 | 第104-105页 |
| 4.4.3 Sesn2过表达对细胞凋亡的影响 | 第105-107页 |
| 4.5 讨论 | 第107页 |
| 4.6 结论 | 第107-108页 |
| 第3章 结论 | 第108-110页 |
| 参考文献 | 第110-130页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第130-132页 |
| 致谢 | 第132页 |
