| 摘要 | 第9-16页 |
| Abstract | 第16-24页 |
| 常用缩写词中英文对照表 | 第25-26页 |
| 前言 | 第26-29页 |
| 第一部分 氧化物三甲胺(TMAO)增加自发性高血压大鼠肾脏水通道蛋白-2的表达 | 第29-56页 |
| 1 材料 | 第30-32页 |
| 1.1 实验动物 | 第30-31页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第31-32页 |
| 2 方法 | 第32-42页 |
| 2.1 动物的饲养、分组、血压测量,实验样品收集和预处理 | 第32-33页 |
| 2.1.1 动物的饲养、分组 | 第32-33页 |
| 2.1.2 动物的饲养、分组、血压测量 | 第33页 |
| 2.1.3 样品收集和预处理 | 第33页 |
| 2.2 TMAO测定 | 第33-34页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第33-34页 |
| 2.2.2 主要仪器与设备 | 第34页 |
| 2.2.3 样品处理 | 第34页 |
| 2.2.4 标准配置 | 第34页 |
| 2.2.5 液相色谱和质谱条件 | 第34页 |
| 2.3 血浆渗透压测定 | 第34-35页 |
| 2.4 ELISA法检测血浆AVP、AQP-2浓度 | 第35-36页 |
| 2.5 RT-PCR分析肾脏AQP-2mRNA表达 | 第36-39页 |
| 2.5.1 溶液配制 | 第36页 |
| 2.5.2 方法 | 第36-39页 |
| 2.6 Westernblot法鉴定肾脏AQP-2蛋白的表达 | 第39-41页 |
| 2.6.1 提取肾脏髓质细胞蛋白 | 第39页 |
| 2.6.2 蛋白定量 | 第39-40页 |
| 2.6.3 SDS-PAGE胶的制备 | 第40页 |
| 2.6.4 上样及电泳 | 第40-41页 |
| 2.7 统计方法 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42-52页 |
| 3.1 大鼠TMAO血浆水平 | 第42-43页 |
| 3.2 TMAO增高大鼠SBP水平 | 第43-45页 |
| 3.3 TMAO增加大鼠POsm水平 | 第45-47页 |
| 3.4 TMAO增加PAVP水平 | 第47-49页 |
| 3.5 TMAO增加PAQP-2水平 | 第49-50页 |
| 3.6 RT-PCR检测AQP-2mRNA表达 | 第50-51页 |
| 3.7 Westernblot检测AQP-2在肾脏中的表达 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 第二部分 氧化三甲胺对水通道蛋白-2作用的分子机制的研究 | 第56-88页 |
| 前言 | 第56-58页 |
| 第一节 稳定表达细胞株HEK293/AQP-2的构建 | 第58-74页 |
| 1 材料 | 第58-61页 |
| 1.1 试剂和细胞 | 第58-59页 |
| 1.2 实验仪器和设备 | 第59-60页 |
| 1.3 主要溶液配制 | 第60-61页 |
| 2 方法 | 第61-70页 |
| 2.1 复苏和培养HEK293细胞 | 第61-63页 |
| 2.1.1 细胞操作准备 | 第61页 |
| 2.1.2 HEK293细胞复苏 | 第61-62页 |
| 2.1.3 换液和培养 | 第62页 |
| 2.1.4 传代和培养 | 第62-63页 |
| 2.1.5 细胞种板 | 第63页 |
| 2.1.6 冻存 | 第63页 |
| 2.2 实验分组 | 第63-64页 |
| 2.3 质粒pcDNA3-AQP-2的转染 | 第64页 |
| 2.4 免疫荧光法评价AQP-2的转染效率及表达 | 第64页 |
| 2.5 RT-PCR法鉴定AQP-2mRNA的表达 | 第64页 |
| 2.6 方法 | 第64-67页 |
| 2.6.1 细胞总RNA的提取 | 第64-65页 |
| 2.6.2 第一条cDNA链的合成 | 第65-66页 |
| 2.6.3 Real-timePCR扩增 | 第66-67页 |
| 2.7 Westernblot法鉴定AQP-2蛋白的表达 | 第67-69页 |
| 2.7.1 提取HEK293细胞蛋白 | 第67页 |
| 2.7.2 蛋白定量 | 第67-68页 |
| 2.7.3 SDS-PAGE胶的制备 | 第68页 |
| 2.7.4 上样及电泳 | 第68-69页 |
| 2.8 统计方法 | 第69-70页 |
| 3 结果 | 第70-73页 |
| 3.1 转染组 HEK293 细胞中稳定表达转染 AQP-2 基因 | 第70-72页 |
| 3.2 RT- PCR 检测转染 AQP-2 m RNA 在转染组 HEK293 细胞中稳定表达 | 第72页 |
| 3.3 Western blot检测转染 AQP-2 蛋白在转染组 HEK293 细胞中稳定表达 | 第72-73页 |
| 4 小结 | 第73-74页 |
| 第二节 不同浓度TMAO对稳定转染后HEK293/AQP-2细胞中AQP-2表达的影响 | 第74-79页 |
| 1 材料 | 第74页 |
| 1.1 主要实验仪器及设备 | 第74页 |
| 1.2 主要试剂和材料 | 第74页 |
| 1.3 细胞 | 第74页 |
| 2 方法 | 第74-76页 |
| 2.1 细胞的培养和分组 | 第74-75页 |
| 2.2 RT-PCR法检测细胞中AQP-2mRNA表达水平 | 第75页 |
| 2.3 Westernblot技术检测细胞中AQP-2蛋白表达水平 | 第75-76页 |
| 2.4 统计方法 | 第76页 |
| 3 结果 | 第76-78页 |
| 3.1 RT-PCR检测不同浓度TMAO干预下AQP-2mRNA表达水平 | 第76-77页 |
| 3.2 TMAO不同浓度干预下AQP-2蛋白的表达 | 第77-78页 |
| 4 小结 | 第78-79页 |
| 第三节 TMAO与AQP-2相互作用机制研究 | 第79-88页 |
| 1 材料 | 第79页 |
| 1.1 细胞 | 第79页 |
| 2 方法 | 第79-82页 |
| 2.1 细胞的培养 | 第79页 |
| 2.2 托伐普坦(Tolvaptan)药物干预实验 | 第79-81页 |
| 2.2.1 主要实验试剂 | 第79页 |
| 2.2.2 主要溶液配制 | 第79-80页 |
| 2.2.3 实验设计 | 第80页 |
| 2.2.4 实验方法 | 第80-81页 |
| 2.3 RT-PCR 法检测细胞中 AQP-2、V2 受体、c AMP, 及 PKAm RNA 表达水平 | 第81页 |
| 2.4 Westernblot技术检测细胞中AQP-2蛋白表达水平 | 第81-82页 |
| 2.5 统计方法 | 第82页 |
| 3 结果 | 第82-87页 |
| 3.1 RTPCR检测相关因子mRNA的表达 | 第82-86页 |
| 3.1.1 溶解曲线分析 | 第82-83页 |
| 3.1.2 扩增曲线分析 | 第83-84页 |
| 3.1.3 RTPCR检测TMAO干预后AQP-2相关因子mRNA的表达 | 第84-86页 |
| 3.2 Westernblot检测检测TMAO干预后AQP-2相关因子蛋白的表达 | 第86-87页 |
| 4 小结 | 第87-88页 |
| 讨论 | 第88-91页 |
| 参考文献 | 第91-99页 |
| 综述 氧化三甲胺：心血管系统疾病的新分子生物学标志物 | 第99-120页 |
| 1.氧化三甲胺的结构特点 | 第101页 |
| 2.氧化三甲胺的生物学功能 | 第101-103页 |
| 3.氧化三甲胺及其前体的膳食来源 | 第103-105页 |
| 4.氧化三甲胺的生理功能 | 第105-106页 |
| 5.氧化三甲胺和疾病 | 第106-111页 |
| 参考文献 | 第111-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 个人简介 | 第122页 |
