| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩写词表 | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 生物碱概述 | 第11页 |
| 1.2 托品烷生物碱简介 | 第11-13页 |
| 1.2.1 樟柳碱 | 第11-12页 |
| 1.2.2 山莨菪碱 | 第12页 |
| 1.2.3 莨菪碱 | 第12页 |
| 1.2.4 东莨菪碱 | 第12-13页 |
| 1.3 药用植物三分三简介 | 第13页 |
| 1.4 托品烷生物碱的生物合成 | 第13-15页 |
| 1.5 莨菪碱-6β-羟化酶 | 第15-16页 |
| 1.6 提高托品烷生物碱含量的方法 | 第16-18页 |
| 1.6.1 诱导法 | 第16页 |
| 1.6.2 基因工程方法 | 第16-17页 |
| 1.6.3 调控方转录因子法 | 第17页 |
| 1.6.4 农杆菌介导遗传转化 | 第17-18页 |
| 1.7 本课题研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 载体及菌种 | 第20页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.1.4 常用试剂 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-43页 |
| 2.2.1 快繁三分三无菌苗 | 第22页 |
| 2.2.2 AaH6H和mAaH6H基因的克隆 | 第22-25页 |
| 2.2.3 进化树建立及多重序列比对 | 第25页 |
| 2.2.4 AaH6H亚细胞定位 | 第25-32页 |
| 2.2.5 植物过表达载体的构建 | 第32-36页 |
| 2.2.6 农杆菌介导遗传转化 | 第36-37页 |
| 2.2.7 转基因毛状根整合鉴定 | 第37-39页 |
| 2.2.8 转基因三分三毛状根qRT-PCR分析 | 第39-42页 |
| 2.2.9 转基因三分三毛状根的生物碱含量的分析 | 第42-43页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第43-57页 |
| 3.1 mAaH6H和AaH6H基因的克隆 | 第43页 |
| 3.2 进化树建立及多重序列比对 | 第43-44页 |
| 3.3 莨菪碱-6β-羟化酶同源建模分析 | 第44-45页 |
| 3.4 AaH6H亚细胞定位 | 第45-47页 |
| 3.4.1 亚细胞定位表达载体构建 | 第45-46页 |
| 3.4.2 激光扫描共聚焦显微镜观察 | 第46-47页 |
| 3.5 三分三植株各器官RNA提取 | 第47页 |
| 3.6 组织表达谱分析 | 第47-48页 |
| 3.7 植物表达载体构建 | 第48-49页 |
| 3.8 农杆菌C58C1介导的三分三外植体转化及毛状根获得 | 第49-50页 |
| 3.9 mAaH6H和AaH6H转基因三分三毛状根整合鉴定 | 第50-51页 |
| 3.9.1 三分三毛状根基因组DNA提取 | 第50页 |
| 3.9.2 pCAMBIA2300+转基因毛状根的PCR阳性克隆鉴定 | 第50-51页 |
| 3.9.3 pCAMBIA2300+-mAaH6H转基因毛状根的PCR阳性克隆鉴定 | 第51页 |
| 3.9.4 pCAMBIA2300+-AaH6H转基因毛状根的PCR阳性克隆鉴定 | 第51页 |
| 3.10 转基因毛状根的qRT-PCR分析及含量测定 | 第51-56页 |
| 3.10.1 AaH6H和mAaH6H转基因毛状根转录水平检测 | 第51-52页 |
| 3.10.2 AaH6H和mAaH6H转基因毛状根托品烷类生物碱含量测定 | 第52-56页 |
| 3.11 本章小结 | 第56-57页 |
| 第4章 全文总结与展望 | 第57-59页 |
| 4.1 研究总结 | 第57-58页 |
| 4.2 展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 论文及成果 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
| 附件 | 第67页 |
