| 摘要 | 第5-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第一章 组织工程人角膜内皮的研究综述 | 第22-49页 |
| 1 角膜内皮与角膜内皮异常 | 第22-33页 |
| 1.1 角膜内皮的形态特征及超微结构 | 第22-24页 |
| 1.2 角膜内皮的细胞密度 | 第24-25页 |
| 1.3 角膜内皮细胞的增殖能力 | 第25-30页 |
| 1.3.1 不同物种的角膜内皮细胞增殖力 | 第26页 |
| 1.3.2 不同年龄段的角膜内皮细胞增殖力 | 第26-29页 |
| 1.3.3 角膜中央和周边的内皮细胞增殖力 | 第29页 |
| 1.3.4 角膜内皮细胞增殖力的体内调控 | 第29-30页 |
| 1.4 角膜内皮的生理功能 | 第30-32页 |
| 1.4.1 角膜内皮的渗漏屏障功能 | 第30-31页 |
| 1.4.2 角膜内皮的主动液泵功能 | 第31-32页 |
| 1.5 角膜内皮异常 | 第32-33页 |
| 2 组织工程人角膜内皮的诞生 | 第33-35页 |
| 3 组织工程人角膜内皮种子细胞的研究概述 | 第35-37页 |
| 3.1 成体干细胞（前体细胞） | 第35页 |
| 3.2 永生化人角膜细胞系 | 第35-36页 |
| 3.3 非转染的人角膜内皮细胞 | 第36-37页 |
| 4 组织工程人角膜内皮载体支架的研究概述 | 第37-42页 |
| 4.1 天然生物膜 | 第37-39页 |
| 4.1.1 脱细胞角膜基质 | 第37页 |
| 4.1.2 后弹力层膜 | 第37-38页 |
| 4.1.3 晶状体前囊膜 | 第38页 |
| 4.1.4 羊膜 | 第38-39页 |
| 4.2 生物大分子 | 第39-40页 |
| 4.2.1 明胶 | 第39页 |
| 4.2.2 胶原 | 第39-40页 |
| 4.2.3 丝素蛋白 | 第40页 |
| 4.3 合成材料 | 第40-41页 |
| 4.4 生物大分子与合成材料共混膜 | 第41页 |
| 4.5 细胞片层 | 第41-42页 |
| 5 组织工程人角膜内皮结构和功能的评价方法 | 第42-45页 |
| 5.1 组织工程人角膜内皮结构的体外评价方法 | 第42-43页 |
| 5.2 组织工程人角膜内皮功能的体外评价方法 | 第43页 |
| 5.3 组织工程人角膜内皮功能的在体评价方法 | 第43-45页 |
| 5.3.1 移植动物模型的选择 | 第43-44页 |
| 5.3.2 移植后在体评价方法 | 第44-45页 |
| 5.3.3 移植后离体评价方法 | 第45页 |
| 6 组织工程角膜内皮体外重建中的问题与难点 | 第45-47页 |
| 7 本文的研究目的与意义 | 第47-49页 |
| 第二章 组织工程人角膜内皮种子细胞的培养及其鉴定 | 第49-63页 |
| 1 材料与用品 | 第50-52页 |
| 1.1 实验材料 | 第50页 |
| 1.2 实验仪器 | 第50页 |
| 1.3 实验药品 | 第50-51页 |
| 1.5 常用溶液的配方 | 第51-52页 |
| 1.5.1 D-Hanks 平衡盐溶液 | 第51页 |
| 1.5.2 PBS 缓冲液 | 第51页 |
| 1.5.3 胰酶-EDTA 消化液 | 第51-52页 |
| 1.5.4 吉姆萨染液（母液） | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-55页 |
| 2.1 单克隆人角膜内皮细胞的体外培养 | 第52-53页 |
| 2.1.1 单克隆人角膜内皮细胞的复苏 | 第52页 |
| 2.1.2 单克隆人角膜内皮细胞的体外扩增培养 | 第52-53页 |
| 2.2 单克隆人角膜内皮细胞的生长特性检测 | 第53页 |
| 2.3 单克隆人角膜内皮细胞的染色体标本制作与组型分析 | 第53-54页 |
| 2.4 单克隆人角膜内皮细胞的免疫化学检测 | 第54-55页 |
| 2.5 单克隆人角膜内皮细胞的致瘤性检测 | 第55页 |
| 3 结果 | 第55-60页 |
| 3.1 单克隆人角膜内皮细胞的形态特征 | 第55-56页 |
| 3.2 单克隆人角膜内皮细胞的生长特性 | 第56页 |
| 3.3 单克隆人角膜内皮细胞的染色体核型 | 第56-57页 |
| 3.4 单克隆人角膜内皮细胞标志蛋白的表达 | 第57页 |
| 3.5 单克隆人角膜内皮细胞功能蛋白的表达 | 第57-59页 |
| 3.5.1 单克隆人角膜内皮细胞连接蛋白的表达 | 第57-58页 |
| 3.5.2 单克隆人角膜内皮细胞膜运输蛋白的表达 | 第58-59页 |
| 3.6 单克隆人角膜内皮细胞的致瘤性 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 第三章 薄化去上皮层修饰羊膜载体支架的制备及其鉴定 | 第63-89页 |
| 1 材料与用品 | 第64-67页 |
| 1.1 实验材料 | 第64页 |
| 1.2 实验仪器 | 第64-65页 |
| 1.3 实验药品 | 第65页 |
| 1.4 常用溶液的配方 | 第65-67页 |
| 1.4.1 PBS 缓冲液（见第二章） | 第65页 |
| 1.4.2 D-Hanks 平衡盐溶液（见第二章） | 第65页 |
| 1.4.3 胰酶-EDTA 消化液（见第二章） | 第65页 |
| 1.4.4 5 mg/mL MTT 溶液 | 第65页 |
| 1.4.5 浸提液Ⅰ | 第65-66页 |
| 1.4.6 浸提液Ⅱ | 第66页 |
| 1.4.7 0.2%茜素红液 | 第66页 |
| 1.4.8 石蜡切片及 HE 染色所需溶液配制 | 第66-67页 |
| 2 方法 | 第67-77页 |
| 2.1 新鲜羊膜的制备与保存 | 第67页 |
| 2.1.1 胎盘的取材 | 第67页 |
| 2.1.2 新鲜羊膜的剥离及清洗 | 第67页 |
| 2.1.3 新鲜羊膜的保存 | 第67页 |
| 2.2 去上皮层羊膜的制备 | 第67-68页 |
| 2.3 去上皮层羊膜的薄化处理 | 第68页 |
| 2.4 薄化去上皮层羊膜的修饰 | 第68页 |
| 2.5 薄化去上皮层修饰羊膜的理化性质检测 | 第68-70页 |
| 2.5.1 厚度检测 | 第68页 |
| 2.5.2 透明度检测 | 第68-69页 |
| 2.5.3 透光率检测 | 第69页 |
| 2.5.4 重金属检测 | 第69-70页 |
| 2.6 薄化去上皮层修饰羊膜的生物学性质检测 | 第70-75页 |
| 2.6.1 薄化去上皮层修饰羊膜的石蜡切片及 HE 染色 | 第70页 |
| 2.6.2 薄化去上皮层修饰羊膜的热源性检测 | 第70-71页 |
| 2.6.3 薄化去上皮层修饰羊膜的细菌内毒素检测 | 第71-74页 |
| 2.6.4 薄化去上皮层修饰羊膜的眼刺激试验 | 第74-75页 |
| 2.6.5 薄化去上皮层修饰羊膜的皮下植入实验 | 第75页 |
| 2.7 薄化去上皮层修饰羊膜与单克隆人角膜内皮细胞的生物相容性研究 | 第75-77页 |
| 2.7.1 薄化去上皮层修饰羊膜浸提液的细胞毒性检测 | 第75-76页 |
| 2.7.2 薄化去上皮层修饰羊膜与单克隆人角膜内皮细胞直接接触的实验 | 第76-77页 |
| 3 结果 | 第77-86页 |
| 3.1 薄化去上皮层修饰羊膜的制备与修饰 | 第77页 |
| 3.2 薄化去上皮层修饰羊膜的理化性质 | 第77-80页 |
| 3.2.1 薄化去上皮层修饰羊膜的厚度 | 第77-78页 |
| 3.2.2 薄化去上皮层修饰羊膜的透明度 | 第78页 |
| 3.2.3 薄化去上皮层修饰羊膜的透光率 | 第78-79页 |
| 3.2.4 薄化去上皮层修饰羊膜的重金属含量 | 第79-80页 |
| 3.3 薄化去上皮层修饰羊膜的生物学评价 | 第80-84页 |
| 3.3.1 薄化去上皮层修饰羊膜的组织结构 | 第80页 |
| 3.3.2 薄化去上皮层修饰羊膜的热源性 | 第80-82页 |
| 3.3.3 薄化去上皮层修饰羊膜的细菌内毒素含量 | 第82页 |
| 3.3.4 薄化去上皮层修饰羊膜的眼刺激实验 | 第82页 |
| 3.3.5 薄化去上皮层修饰羊膜的大鼠皮下植入实验 | 第82-84页 |
| 3.4 薄化去上皮层修饰羊膜与单克隆人角膜内皮细胞的生物相容性研究 | 第84-86页 |
| 3.4.1 薄化去上皮层修饰羊膜浸提液的细胞毒性 | 第84页 |
| 3.4.2 薄化去上皮层修饰羊膜与单克隆人角膜内皮细胞的直接接触实验 | 第84-86页 |
| 4 讨论 | 第86-88页 |
| 5 结论 | 第88-89页 |
| 第四章 组织工程人角膜内皮的体外重建及其鉴定 | 第89-102页 |
| 1 材料与用品 | 第90-91页 |
| 1.1 实验材料 | 第90页 |
| 1.2 实验仪器 | 第90页 |
| 1.3 实验药品 | 第90-91页 |
| 1.4 常用溶液的配方 | 第91页 |
| 1.4.1 PBS 缓冲液（见第二章） | 第91页 |
| 1.4.2 D-Hanks 平衡盐溶液（见第二章） | 第91页 |
| 1.4.3 胰酶-EDTA 消化液（见第二章） | 第91页 |
| 1.4.4 0.2%茜素红液（见第三章） | 第91页 |
| 2 方法 | 第91-93页 |
| 2.1 组织工程人角膜内皮种子细胞的扩增培养 | 第91页 |
| 2.2 薄化去上皮层修饰羊膜的制备与修饰 | 第91页 |
| 2.3 组织工程人角膜内皮的体外重建 | 第91-92页 |
| 2.4 组织工程人角膜内皮的鉴定 | 第92-93页 |
| 2.4.1 形态观察 | 第92页 |
| 2.4.2 茜素红染色和细胞密度计数 | 第92页 |
| 2.4.3 免疫荧光化学检测 | 第92-93页 |
| 2.4.4 石蜡切片及 HE 染色 | 第93页 |
| 2.4.5 扫描电镜检测 | 第93页 |
| 2.4.6 透射电镜检测 | 第93页 |
| 3 结果 | 第93-98页 |
| 3.1 形态特征 | 第93-94页 |
| 3.2 茜素红染色 | 第94-95页 |
| 3.3 细胞密度 | 第95-96页 |
| 3.4 石蜡切片及 HE 染色结果 | 第96页 |
| 3.5 免疫荧光检测 | 第96-97页 |
| 3.6 扫描电镜检测 | 第97-98页 |
| 3.7 透射电镜检测 | 第98页 |
| 4 讨论 | 第98-101页 |
| 5 结论 | 第101-102页 |
| 第五章 组织工程人角膜内皮的家猫移植 | 第102-118页 |
| 1 材料与用品 | 第103-104页 |
| 1.1 实验材料 | 第103页 |
| 1.2 实验仪器 | 第103-104页 |
| 1.3 实验药品 | 第104页 |
| 1.4 常用溶液的配方 | 第104页 |
| 1.4.1 DiI 工作液 | 第104页 |
| 2 方法 | 第104-108页 |
| 2.1 组织工程人角膜内皮的体外重建 | 第104-105页 |
| 2.2 组织工程人角膜内皮的家猫后板层角膜内皮移植 | 第105-106页 |
| 2.3 移植家猫的护理和观察 | 第106页 |
| 2.4 移植家猫术后的在体检测 | 第106页 |
| 2.5 移植家猫术后的离体检测 | 第106-108页 |
| 2.5.1 DiI 荧光标记检测 | 第106-107页 |
| 2.5.2 茜素红染色 | 第107页 |
| 2.5.3 石蜡切片切片及 HE 染色 | 第107页 |
| 2.5.4 扫描电镜检测 | 第107页 |
| 2.5.5 透射电镜检测 | 第107页 |
| 2.5.6 房水的二维电泳检测 | 第107-108页 |
| 3 结果 | 第108-114页 |
| 3.1 体外重建的组织工程人角膜内皮 | 第108页 |
| 3.2 移植家猫术后的在体检测 | 第108-110页 |
| 3.2.1 裂隙灯显微镜检测 | 第108-109页 |
| 3.2.2 角膜厚度检测 | 第109-110页 |
| 3.2.3 眼压检测 | 第110页 |
| 3.4 移植家猫术后的离体鉴定 | 第110-114页 |
| 3.4.1 DiI 荧光标记检测 | 第110-111页 |
| 3.4.2 茜素红染色 | 第111页 |
| 3.4.3 石蜡切片及 HE 染色 | 第111-112页 |
| 3.4.4 扫描电镜检测 | 第112页 |
| 3.4.5 透射电镜检测 | 第112-113页 |
| 3.4.6 房水二维电泳检测 | 第113-114页 |
| 4 讨论 | 第114-117页 |
| 5 结论 | 第117-118页 |
| 第六章 组织工程人角膜内皮的猕猴移植 | 第118-132页 |
| 1 材料与用品 | 第118-119页 |
| 1.1 实验材料 | 第118页 |
| 1.2 实验仪器 | 第118-119页 |
| 1.3 实验药品 | 第119页 |
| 1.4 常用溶液的配方 | 第119页 |
| 1.4.1 DiI 工作液 | 第119页 |
| 2 方法 | 第119-121页 |
| 2.1 组织工程人角膜内皮的体外重建 | 第119-120页 |
| 2.2 组织工程人角膜内皮的猕猴后板层角膜内皮移植 | 第120页 |
| 2.3 移植猕猴的护理和观察 | 第120页 |
| 2.4 移植猕猴术后的在体检测 | 第120页 |
| 2.5 移植猕猴术后的离体检测 | 第120-121页 |
| 2.5.1 DiI 荧光标记检测 | 第120-121页 |
| 2.5.2 茜素红染色 | 第121页 |
| 2.5.3 石蜡切片切片及 HE 染色 | 第121页 |
| 2.5.4 扫描电镜检测 | 第121页 |
| 2.5.5 透射电镜检测 | 第121页 |
| 3 结果 | 第121-129页 |
| 3.1 体外重建的组织工程人角膜内皮 | 第121-122页 |
| 3.2 移植猕猴术后的在体检测 | 第122-125页 |
| 3.2.1 裂隙灯显微镜检测 | 第122-124页 |
| 3.2.2 角膜厚度检测 | 第124页 |
| 3.2.3 眼压检测 | 第124-125页 |
| 3.3 移植猕猴术后的离体检测 | 第125-129页 |
| 3.3.1 DiI 荧光标记 | 第125-126页 |
| 3.3.2 茜素红染色 | 第126页 |
| 3.3.3 石蜡切片及 HE 染色 | 第126-127页 |
| 3.3.4 扫描电镜检测 | 第127页 |
| 3.3.5 透射电镜检测 | 第127-129页 |
| 4 讨论 | 第129-130页 |
| 5 结论 | 第130-132页 |
| 全文总结 | 第132-134页 |
| 参考文献 | 第134-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
| 个人简历 | 第153页 |
| 在学期间发表的学术论文及专利 | 第153-155页 |
