| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第14-34页 |
| 1.1 细胞外基质 | 第14-16页 |
| 1.1.1 基膜 | 第14-15页 |
| 1.1.2 细胞基质黏附 | 第15-16页 |
| 1.2 胶原蛋白的研究进展 | 第16-21页 |
| 1.2.1 胶原蛋白的种类及结构特征 | 第16-17页 |
| 1.2.2 胶原蛋白的生物合成 | 第17-19页 |
| 1.2.3 类胶原蛋白的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.2.4 类胶原蛋白的重组表达 | 第20-21页 |
| 1.3 重组胶原蛋白Scl2的研究进展 | 第21-26页 |
| 1.3.1 Scl2胶原蛋白的结构解析 | 第21-23页 |
| 1.3.2 Scl2胶原蛋白的工业化潜能 | 第23页 |
| 1.3.4 Scl2胶原蛋白骨架的功能位点改造 | 第23-24页 |
| 1.3.5 Scl2胶原蛋白融合表达小分子多肽的应用 | 第24页 |
| 1.3.6 Scl2胶原蛋白在组织工程应用领域的开发 | 第24-26页 |
| 1.4 整合素家族 | 第26-33页 |
| 1.4.1 整合素的结构及分类 | 第26-28页 |
| 1.4.2 整合素的激活机制 | 第28-29页 |
| 1.4.3 整合素结合配体 | 第29-30页 |
| 1.4.5 RGD在组织工程中的应用 | 第30-32页 |
| 1.4.6 RGD靶向抗肿瘤药物研究 | 第32-33页 |
| 1.5 本论文研究思路和主要内容 | 第33-34页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第34-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-36页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第34页 |
| 2.1.2 主要试剂、工具酶及试剂盒 | 第34-35页 |
| 2.1.3 培养基及缓冲液 | 第35-36页 |
| 2.1.4 实验试剂的配制 | 第36页 |
| 2.2 实验仪器 | 第36-38页 |
| 2.3 实验及分析方法 | 第38-42页 |
| 2.3.1 分子克隆实验 | 第38-39页 |
| 2.3.2 感受态细胞转化 | 第39-40页 |
| 2.3.3 SDS-PAGE电泳 | 第40页 |
| 2.3.4 蛋白样品脱盐 | 第40-42页 |
| 第三章 重组胶原蛋白Scl2功能位点改造 | 第42-52页 |
| 3.1 前言 | 第42-43页 |
| 3.2 材料与方法 | 第43-47页 |
| 3.2.1 质粒与菌株 | 第43页 |
| 3.2.2 工具酶及主要试剂 | 第43页 |
| 3.2.3 培养基和缓冲液 | 第43页 |
| 3.2.4 分子生物学基本操作 | 第43页 |
| 3.2.5 引物设计与合成 | 第43-44页 |
| 3.2.6 RGD系列位点引入 | 第44-45页 |
| 3.2.7 GFPGER位点引入 | 第45-47页 |
| 3.2.8 重组Scl2系列胶原蛋白的表达 | 第47页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第47-51页 |
| 3.3.1 RGD系列位点引入 | 第47-48页 |
| 3.3.2 GFPGER位点引入 | 第48-50页 |
| 3.3.3 Scl2系列蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第50-51页 |
| 3.4 本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 SCL2系列蛋白高效纯化方法建立 | 第52-65页 |
| 4.1 前言 | 第52-53页 |
| 4.2 实验材料 | 第53页 |
| 4.2.1 质粒与菌株 | 第53页 |
| 4.2.2 工具酶及主要试剂 | 第53页 |
| 4.2.3 缓冲液及反应试剂 | 第53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-56页 |
| 4.3.1 Ni~(2+)柱亲和层析 | 第53-54页 |
| 4.3.2 酸法沉降 | 第54-55页 |
| 4.3.3 木瓜蛋白酶法水解 | 第55页 |
| 4.3.4 胃蛋白酶水解 | 第55-56页 |
| 4.3.5 蛋白质脱盐与浓缩 | 第56页 |
| 4.3.6 蛋白质的保存 | 第56页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第56-63页 |
| 4.4.1 Ni~(2+)柱亲和层析 | 第56-57页 |
| 4.4.2 酸法沉降 | 第57-59页 |
| 4.4.3 蛋白酶水解 | 第59-63页 |
| 4.5 本章小结 | 第63-65页 |
| 第五章 SCL2胶原蛋白活性测试 | 第65-78页 |
| 5.1 前言 | 第65页 |
| 5.2 实验材料 | 第65-66页 |
| 5.2.1 细胞与黏附分子 | 第65-66页 |
| 5.2.2 实验试剂及设备 | 第66页 |
| 5.3 实验方法 | 第66-69页 |
| 5.3.1 蛋白浓度测定 | 第66-67页 |
| 5.3.2 细胞培养 | 第67-68页 |
| 5.3.3 细胞悬滴培养 | 第68-69页 |
| 5.3.4 黏附实验 | 第69页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第69-77页 |
| 5.4.1 蛋白定量浓度测定 | 第69-70页 |
| 5.4.2 MiaPcCa-2细胞悬滴培养 | 第70-71页 |
| 5.4.3 PSC细胞悬滴分散效果 | 第71-72页 |
| 5.4.4 L929细胞黏附效果 | 第72-75页 |
| 5.4.5 HUVEC细胞黏附效果 | 第75-77页 |
| 5.5 本章小结 | 第77-78页 |
| 第六章 总结与展望 | 第78-80页 |
| 6.1 总结 | 第78-79页 |
| 6.2 展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |