| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1 昆虫吐丝概况 | 第11-13页 |
| 1.1 昆虫吐丝行为的生物学意义 | 第11-12页 |
| 1.2 棉大卷叶螟的生物学习性与为害特征 | 第12-13页 |
| 2 丝的形态学研究进展 | 第13-15页 |
| 2.1 泌丝腺体的组成部分 | 第13-14页 |
| 2.2 丝的结构与组成 | 第14-15页 |
| 3 RNA干扰研究概况 | 第15-19页 |
| 3.1 RNA干扰的作用机制 | 第16页 |
| 3.2 RNA干扰技术防治害虫的应用 | 第16-19页 |
| 3.2.1 dsRNA合成 | 第17页 |
| 3.2.2 昆虫RNAi的方法 | 第17-19页 |
| 3.2.3 RNAi技术的生产实践应用 | 第19页 |
| 4 研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 棉大卷叶螟丝素P25基因的克隆 | 第21-41页 |
| 2.1 试验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 试验虫源 | 第21页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第22页 |
| 2.2 总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.3 cDNA第一链合成 | 第23-24页 |
| 2.4 棉大卷叶螟丝素P25基因中间片段的扩增 | 第24-28页 |
| 2.4.1 引物设计与合成 | 第24页 |
| 2.4.2 丝素P25基因中间片段的扩增 | 第24-25页 |
| 2.4.3 目的基因片段产物的回收与纯化 | 第25-26页 |
| 2.4.4 目的基因产物的连接 | 第26页 |
| 2.4.5 连接产物的转化 | 第26-27页 |
| 2.4.6 单菌落PCR检测 | 第27页 |
| 2.4.7 测序 | 第27-28页 |
| 2.4.8 序列分析 | 第28页 |
| 2.5 丝素P25基因的3'Race | 第28-30页 |
| 2.5.1 引物设计 | 第28页 |
| 2.5.2 3'RACE的扩增 | 第28-30页 |
| 2.6 丝素P25基因的5'Race | 第30-34页 |
| 2.6.1 引物设计 | 第30页 |
| 2.6.2 棉大卷叶螟总RNA中裸露的5'磷酸基团的去除 | 第30-31页 |
| 2.6.3 mRNA 5'帽子结构的去除 | 第31页 |
| 2.6.4 5'RACE Adaptor的连接 | 第31-33页 |
| 2.6.5 反转录 | 第33页 |
| 2.6.6 PCR扩增 | 第33-34页 |
| 2.7 序列分析 | 第34-35页 |
| 2.8 结果与分析 | 第35-40页 |
| 2.8.1 丝素P25基因中间片段扩增结果 | 第35-36页 |
| 2.8.2 3'RACE扩增结果 | 第36页 |
| 2.8.3 5'RACE扩增结果 | 第36-37页 |
| 2.8.4 开放阅读框扩增结果 | 第37页 |
| 2.8.5 序列分析 | 第37-40页 |
| 2.9 讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 丝素P25基因在棉大卷叶螟不同发育阶段以及饲喂不同寄主后的表达分析 | 第41-51页 |
| 3.1 试验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 棉大卷叶螟虫源 | 第41页 |
| 3.1.2 试验试剂 | 第41-42页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第42页 |
| 3.2 试验方法 | 第42-46页 |
| 3.2.1 不同发育阶段处理 | 第42页 |
| 3.2.2 不同寄主处理 | 第42页 |
| 3.2.3 不同处理样品的RNA提取 | 第42-44页 |
| 3.2.4 反转录 | 第44页 |
| 3.2.5 引物设计与合成 | 第44-45页 |
| 3.2.6 丝素只P25基因实时定量分析 | 第45-46页 |
| 3.2.7 数据处理 | 第46页 |
| 3.3 结果与分析 | 第46-49页 |
| 3.3.1 引物与内参基因的可靠性 | 第46-48页 |
| 3.3.2 棉大卷叶螟不同发育阶段丝素P25基因的相对表达量 | 第48-49页 |
| 3.3.3 棉大卷叶螟饲喂不同寄主后丝素P25基因的相对表达量 | 第49页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 棉大卷叶螟丝素P25基因的RNA干扰 | 第51-66页 |
| 4.1 供试材料 | 第51-52页 |
| 4.1.1 试验虫源 | 第51页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第51-52页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第52页 |
| 4.2 试验步骤 | 第52-58页 |
| 4.2.1 引物的设计与合成 | 第52页 |
| 4.2.2 目标基因片段的制备 | 第52-53页 |
| 4.2.3 连接与转化 | 第53-54页 |
| 4.2.4 提取质粒 | 第54页 |
| 4.2.5 酶切 | 第54-55页 |
| 4.2.6 连接 | 第55-56页 |
| 4.2.7 转化至HT115大肠杆菌 | 第56页 |
| 4.2.8 dsRNA在大肠杆菌中的表达 | 第56-57页 |
| 4.2.9 dsRNA检验 | 第57页 |
| 4.2.10 喂食表达dsRNA菌液的试验方法 | 第57-58页 |
| 4.3 结果与分析 | 第58-64页 |
| 4.3.1 dsRNA在大肠杆菌中的表达 | 第58-59页 |
| 4.3.2 饲喂菌液对棉大卷叶螟幼虫的影响 | 第59-60页 |
| 4.3.3 饲喂不同浓度菌液对棉大卷叶螟幼虫丝素P25基因表达量的影响 | 第60-61页 |
| 4.3.4 不同虫龄棉大卷叶螟幼虫喂食菌液不同天数后丝素P25基因的相对表达量 | 第61-63页 |
| 4.3.5 饲喂菌液对不同寄主上棉大卷叶螟幼虫丝素P25基因表达量的影响 | 第63-64页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
