| 符号说明 | 第4-10页 |
| 中文摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 1 引言 | 第12-26页 |
| 1.1 光和植物的生长发育 | 第12-14页 |
| 1.1.1 光和植物种子萌发 | 第12页 |
| 1.1.2 光和植物叶片的生长发育 | 第12-13页 |
| 1.1.3 光和植物茎的生长 | 第13页 |
| 1.1.4 光对植物叶绿素合成的影响 | 第13-14页 |
| 1.1.5 光对花青素合成的影响 | 第14页 |
| 1.2 植物感受光照调控的光受体 | 第14-16页 |
| 1.3 UV-B的光受体UVR8及调控过程中的上游组件 | 第16-24页 |
| 1.3.1 E3泛素化连接酶COP1 | 第17-18页 |
| 1.3.2 bZIP转录因子HY5 | 第18-19页 |
| 1.3.3 UVR8的结构 | 第19-21页 |
| 1.3.4 UVR8的功能 | 第21-22页 |
| 1.3.4.1 UVR8在去黄化中的作用 | 第21页 |
| 1.3.4.2 UVR8对UV-B胁迫响应 | 第21-22页 |
| 1.3.4.3 UVR8其他方面的作用 | 第22页 |
| 1.3.5 UVR8的信号传导 | 第22-24页 |
| 1.3.6 UVR8所介导的UV-B信号与可见光信号转导过程的异同 | 第24页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-47页 |
| 2.1 试验材料 | 第26-29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 植物材料培养与处理 | 第26页 |
| 2.1.3 菌株及载体 | 第26页 |
| 2.1.4 酶、试剂盒、生化试剂、培养基等 | 第26-28页 |
| 2.1.5 仪器与设备 | 第28页 |
| 2.1.6 PCR引物 | 第28-29页 |
| 2.2 试验方法 | 第29-47页 |
| 2.2.1 植物总RNA的提取 | 第29-31页 |
| 2.2.1.1 试剂盒提取(DP43T) | 第29-30页 |
| 2.2.1.2 Trizol试剂盒提总RNA(改进的一步法) | 第30-31页 |
| 2.2.2 总RNA含量与纯度检测 | 第31页 |
| 2.2.3 植物RNA的纯化(除DNA)方法 | 第31页 |
| 2.2.4 反转录cDNA第一链的合成 | 第31-32页 |
| 2.2.5 反转录产物质量检测 | 第32页 |
| 2.2.6 cDNA纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.7 cDNA末端加尾 | 第33页 |
| 2.2.8 植物基因组DNA的提取及纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.8.1 小量CTAB法提取植物基因组DNA | 第33-34页 |
| 2.2.8.2 植物基因组DNA的纯化 | 第34页 |
| 2.2.8.3 基因组DNA含量与纯度检测 | 第34页 |
| 2.2.9 基因克隆 | 第34-35页 |
| 2.2.9.1 PCR扩增体系 | 第34-35页 |
| 2.2.9.2 MdUVR8基因的克隆 | 第35页 |
| 2.2.10 目的片段的回收 | 第35-36页 |
| 2.2.11 连接反应 | 第36-37页 |
| 2.2.12 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第37页 |
| 2.2.12.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第37页 |
| 2.2.12.2 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第37页 |
| 2.2.13 根癌农杆菌LBA4404和GV3101感受态细胞的制备与转化 | 第37-38页 |
| 2.2.13.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第38页 |
| 2.2.13.2 电击法转化农杆菌 | 第38页 |
| 2.2.14 MdUVR8基因载体的构建 | 第38-39页 |
| 2.2.14.1 原核表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 2.2.14.2 MdUVR8基因正义表达载体的构建 | 第39页 |
| 2.2.14.3 MdUVR8双杂载体及表达载体的构建 | 第39页 |
| 2.2.15 酵母双杂交(Yeast-two-hybrid)试验 | 第39-42页 |
| 2.2.16 免疫共沉淀(CO-IP)实验 | 第42-44页 |
| 2.2.16.1 考马斯亮蓝染色 | 第42页 |
| 2.2.16.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第42-43页 |
| 2.2.16.3 蛋白沉淀 | 第43-44页 |
| 2.2.16.4 抗体制备 | 第44页 |
| 2.2.17 Western分析蛋白 | 第44-45页 |
| 2.2.17.1 转膜 | 第44页 |
| 2.2.17.2 Western Blot | 第44-45页 |
| 2.2.18 转基因植物材料的获得 | 第45页 |
| 2.2.18.1 农杆菌介导的拟南芥转化——花序侵(沾花法)(Clough,1998) | 第45页 |
| 2.2.18.2 转基因拟南芥的鉴定 | 第45页 |
| 2.2.19 转基因植株的生物学鉴定分析 | 第45-46页 |
| 2.2.19.1 转基因植株的基因组DNA鉴定 | 第45-46页 |
| 2.2.19.2 转基因植株的RT-PCR表达水平鉴定 | 第46页 |
| 2.2.20 苹果愈伤的转化 | 第46页 |
| 2.2.21 拟南芥相关指标测定 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-57页 |
| 3.1 苹果UV-B光受体基因MdUVR8全长cDNA的分子克隆及分析 | 第47-50页 |
| 3.1.1 苹果MdUVR8基因的RACE扩增和全长cDNA序列分离 | 第47-49页 |
| 3.1.2 MdUVR8同源关系比对 | 第49-50页 |
| 3.2 苹果MdUVR8基因原核表达载体的构建及表达 | 第50-51页 |
| 3.3 苹果UV-B光受体基因MdUVR8表达 | 第51-52页 |
| 3.3.1 MdUVR8组织表达检测 | 第51页 |
| 3.3.2 MdUVR8的光诱导表达分析 | 第51-52页 |
| 3.4 苹果MdUVR8基因与拟南芥相应突变体的功能互补 | 第52-54页 |
| 3.4.1 MdUVR8与拟南芥uvr8突变体的功能互补的表型 | 第53-54页 |
| 3.4.2 MdUVR8与拟南芥uvr8突变体的功能互补的下游基因的表达调控 | 第54页 |
| 3.5 苹果MdUVR8与COP1的蛋白互作 | 第54-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读硕士学位期间发表和形成的学术论文 | 第68页 |
