| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 1 引言 | 第11-21页 |
| 1.1 猪轮状病毒的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.1.1 猪轮状病毒的历史研究背景 | 第11页 |
| 1.1.2 猪轮状病毒的流行病学特点 | 第11页 |
| 1.1.3 猪轮状病毒病的诊断与防治措施 | 第11-12页 |
| 1.2 猪轮状病毒的生物学进展 | 第12-14页 |
| 1.2.1 猪轮状病毒的形态及理化性质 | 第12-13页 |
| 1.2.2 猪轮状病毒的抗原及其分型 | 第13页 |
| 1.2.3 猪轮状病毒的细胞培养特性 | 第13-14页 |
| 1.3 猪轮状病毒蛋白及其功能研究 | 第14-17页 |
| 1.3.1 猪轮状病毒基因组的结构特征 | 第14页 |
| 1.3.2 猪轮状病毒结构蛋白及作用 | 第14-16页 |
| 1.3.3 猪轮状病毒非结构蛋白及其功能 | 第16-17页 |
| 1.4 脂筏研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4.1 脂筏的概念及结构功能 | 第17页 |
| 1.4.2 研究脂筏与病毒感染的常用方法 | 第17-18页 |
| 1.5 细胞膜胆固醇在病毒感染中的作用 | 第18-20页 |
| 1.5.1 在包膜病毒中的作用 | 第18-19页 |
| 1.5.2 在无囊膜病毒中的作用 | 第19-20页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 病毒与细胞 | 第21页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第21页 |
| 2.1.3 菌种及载体 | 第21页 |
| 2.1.4 试剂盒、工具酶及抗体试剂 | 第21页 |
| 2.1.5 主要药品及试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.6 主要试剂配制及储存 | 第22-23页 |
| 2.1.7 仪器及设备 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-34页 |
| 2.2.1 猪轮状病VP4全长基因的克隆 | 第24-25页 |
| 2.2.2 感受态的制备 | 第25页 |
| 2.2.3 重组质粒VP4-pMD18-T质粒的构建 | 第25-27页 |
| 2.2.4 原核表达载体质粒pGEX-6P-1-VP4的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.5 重组质粒pGEX-6P-1-VP4的诱导表达 | 第28-29页 |
| 2.2.6 重组蛋白的纯化及复性 | 第29-30页 |
| 2.2.7 猪轮状病毒VP4多克隆抗体的制备与鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.8 胆固醇对猪轮状病毒感染的影响实验 | 第31-34页 |
| 2.3 统计分析 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-47页 |
| 3.1 猪轮状病毒原核表达载体的构建 | 第35-37页 |
| 3.1.1 猪轮状病毒VP4基因的克隆 | 第35页 |
| 3.1.2 重组质粒VP4-pMD18-T的构建及鉴定 | 第35-36页 |
| 3.1.3 重组质粒pGEX-6P-1-VP4的构建及鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2 融合蛋白的表达与纯化 | 第37-38页 |
| 3.2.1 融合蛋白的表达 | 第37-38页 |
| 3.2.2 猪轮状病毒VP4蛋白的纯化 | 第38页 |
| 3.3 猪轮状病毒VP4多克隆抗体的生物活性鉴定 | 第38-40页 |
| 3.3.1 猪轮状病毒VP4多克隆抗体效价的检测 | 第38-39页 |
| 3.3.2 猪轮状病毒VP4多抗血清的间接免疫荧光检测 | 第39页 |
| 3.3.3 猪轮状病毒VP4多抗血.清的Western Blot检测 | 第39-40页 |
| 3.4 胆固醇对猪轮状病毒感染的影响实验 | 第40-47页 |
| 3.4.1 猪轮状病毒DN30209毒株在MA104细胞上的病变 | 第40-41页 |
| 3.4.2 胆固醇消耗对病毒感染的影响 | 第41-44页 |
| 3.4.3 胆固醇恢复对病毒感染的影响 | 第44-47页 |
| 4 讨论 | 第47-52页 |
| 4.1 猪轮状病毒VP4全基因的克隆与序列比较 | 第47页 |
| 4.2 猪轮状病毒VP4基因在大肠杆菌中的表达 | 第47-48页 |
| 4.2.1 猪轮状病毒VP4原核表达质粒的设计与构建 | 第47-48页 |
| 4.2.2 重组蛋白的纯化与复性 | 第48页 |
| 4.3 多克隆抗体血清的制备与鉴定 | 第48-49页 |
| 4.4 细胞膜中胆固醇对猪轮状病毒感染MA104细胞的影响 | 第49-52页 |
| 4.4.1 消耗细胞膜胆固醇对猪轮状病毒感染的影响 | 第49-50页 |
| 4.4.2 补充细胞膜胆固醇可使猪轮状病毒的感染力得到恢复 | 第50-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第60页 |
