| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 文献综述 | 第10-25页 |
| 第一章 溶酶体α-甘露糖苷酶及截短基因外源表达的研究进展 | 第10-25页 |
| 1.1 α-甘露糖苷酶的研究进展 | 第10-19页 |
| 1.1.1 α-甘露糖苷酶的分类 | 第10-11页 |
| 1.1.2 α-甘露糖苷酶的结构及其在糖基化过程中的作用 | 第11-16页 |
| 1.1.3 α-甘露糖苷酶的克隆表达 | 第16-18页 |
| 1.1.4 α-甘露糖苷酶的活性及其影响因素 | 第18-19页 |
| 1.2 截短基因外源表达的研究进展 | 第19-24页 |
| 1.2.1 截短基因外源表达的意义 | 第20-22页 |
| 1.2.2 截短基因截短部分的选择 | 第22-24页 |
| 1.3 酵母表达的研究进展 | 第24-25页 |
| 试验研究 | 第25-43页 |
| 第二章 山羊溶酶体α-甘露糖苷酶截短基因的酵母表达 | 第25-36页 |
| 2.1 材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26页 |
| 2.1.3 试验菌株和载体 | 第26页 |
| 2.1.4 培养基 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 截短目的基因的扩增 | 第27页 |
| 2.2.2 重组克隆质粒的构建及鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.3 重组酵母表达质粒的制备及鉴定 | 第28页 |
| 2.2.4 毕赤酵母表达菌的转化 | 第28-29页 |
| 2.2.5 重组表达菌株的筛选和鉴定 | 第29页 |
| 2.2.6 重组酵母菌的诱导表达 | 第29页 |
| 2.2.7 酵母表达产物的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3 结果 | 第30-33页 |
| 2.3.1 截短片段克隆的鉴定 | 第30-32页 |
| 2.3.2 重组表达质粒的鉴定 | 第32页 |
| 2.3.3 重组酵母菌株基因组的 PCR | 第32-33页 |
| 2.3.4 表达产物的活性检测 | 第33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-35页 |
| 2.4.1 蛋白截短对酶活性的影响 | 第33-34页 |
| 2.4.2 蛋白亚基结构域的作用 | 第34-35页 |
| 2.5 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 截短基因的表达产物 chLAMt 的纯化及其特性的鉴定 | 第36-43页 |
| 3.1 材料 | 第36页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 3.2 方法 | 第36-37页 |
| 3.2.1 表达产物 chLAMt 的纯化 | 第36页 |
| 3.2.2 表达产物 chLAMt 的 western blotting | 第36页 |
| 3.2.3 表达产物 chLAMt 的特性鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3 结果 | 第37-41页 |
| 3.3.1 表达产物 chLAMt 的纯化 | 第37-38页 |
| 3.3.2 表达产物 chLAMt 的 western blot | 第38页 |
| 3.3.3 表达产物 chLAMt 的特性鉴定 | 第38-40页 |
| 3.3.4 表达产物 chLAMt 的酶动力学分析 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-42页 |
| 3.4.1 截短基因的毕赤酵母表达 | 第41页 |
| 3.4.2 截短表达对酶活最适温度及 pH 值的影响 | 第41-42页 |
| 3.4.3 截短表达对酶 Km 变化及离子对酶活的影响 | 第42页 |
| 3.5 小结 | 第42-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简介 | 第53页 |
