| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 主要英文缩略词 | 第14-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-30页 |
| ·苜蓿基因工程的研究进展 | 第15-21页 |
| ·苜蓿遗传转化的研究进展 | 第15-19页 |
| ·苜蓿在生产疫苗中的应用 | 第19-20页 |
| ·苜蓿基因工程的前景和局限性 | 第20-21页 |
| ·小反刍兽疫研究进展 | 第21-26页 |
| ·小反刍兽疫概况 | 第21页 |
| ·小反刍兽疫病毒学 | 第21-23页 |
| ·小反刍兽疫的临床学研究 | 第23-24页 |
| ·小反刍兽疫的预防与控制 | 第24-25页 |
| ·小反刍兽疫病毒蛋白表达和病原诊断技术国内外研究概况 | 第25页 |
| ·当前存在的问题及展望 | 第25-26页 |
| ·转基因植物疫苗的研究现状 | 第26-29页 |
| ·转基因植物疫苗 | 第26页 |
| ·转基因植物疫苗的研究现状及应用 | 第26-27页 |
| ·转基因植物疫苗的优点及存在的问题 | 第27-28页 |
| ·转基因植物疫苗的研究及应用前景 | 第28-29页 |
| ·目的意义 | 第29-30页 |
| 2 小反刍兽疫病毒H、F基因及表达载体相关序列克隆 | 第30-36页 |
| ·试验材料 | 第30页 |
| ·菌株、DNA和质粒 | 第30页 |
| ·载体 | 第30页 |
| ·酶与化学试剂 | 第30页 |
| ·仪器材料 | 第30页 |
| ·试验方法 | 第30-33页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·各个基因的和DNA片段TA克隆 | 第31-33页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-36页 |
| ·目的基因片段PCR扩增结果 | 第33-34页 |
| ·重组质粒单酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 3 植物表达载体的构建 | 第36-44页 |
| ·试验材料 | 第36页 |
| ·菌株与载体 | 第36页 |
| ·酶和试剂 | 第36页 |
| ·仪器材料 | 第36页 |
| ·试验方法 | 第36-39页 |
| ·中间表达载体PBI121-GFP的构建 | 第36-37页 |
| ·植物表达载体PBI121-GFP-H、PBI121-GFP-H-KDEL的构建 | 第37页 |
| ·中间表达载体PBI121-GFP-MAR的构建 | 第37-38页 |
| ·植物表达载体PBI121-GFP-MAR-H、PBI121-GFP-MAR-H-KDEL的构建 | 第38页 |
| ·植物表达载体PBI121-GFP-MAR-F的构建 | 第38页 |
| ·植物表达载体PBI121-GFP-H转入到农杆菌 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-44页 |
| ·表达载体PBI121-GFP、PBI121-GFP-H、PBI121-GFP-H-KDEL的构建 | 第39-40页 |
| ·表达载体PBI121-GFP-MAR-H、PBI121-GFP-MAR-H-KDEL和PBI121-GFP-MAR-F的构建 | 第40-43页 |
| ·表达载体PBI121-GFP-H转入农杆菌的验证 | 第43-44页 |
| 4 农杆菌介导的苜蓿遗传转化 | 第44-51页 |
| ·试验材料 | 第44-45页 |
| ·供试苜蓿品种 | 第44页 |
| ·菌株和载体 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·主要生化试剂及其配制 | 第44-45页 |
| ·试验方法 | 第45-47页 |
| ·农杆菌的活化及菌液制备 | 第45页 |
| ·Km筛选浓度的确定 | 第45页 |
| ·头孢霉素(Cef)浓度的筛选 | 第45页 |
| ·根癌农杆菌介导的苜蓿的遗传转化 | 第45-46页 |
| ·苜蓿愈伤组织总DNA的提取与检测 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-51页 |
| ·卡那霉素(Km)筛选浓度的确定 | 第47-48页 |
| ·头孢霉素(Cef)浓度的确定 | 第48页 |
| ·预培养时间对愈伤组织诱导率的影响 | 第48-49页 |
| ·侵染时间对愈伤组织诱导率的影响 | 第49页 |
| ·共培养时间对愈伤组织诱导率的影响 | 第49-50页 |
| ·转基因苜蓿的检测 | 第50-51页 |
| 5 讨论与展望 | 第51-57页 |
| ·植物表达载体的改造 | 第51-53页 |
| ·关于KDEL序列 | 第51页 |
| ·关于GFP基因 | 第51页 |
| ·关于MAR序列 | 第51-53页 |
| ·关于酶切位点 | 第53页 |
| ·关于去磷酸化 | 第53页 |
| ·影响农杆菌介导转化效率因素的研究 | 第53-54页 |
| ·农杆菌菌株对转化的影响 | 第53页 |
| ·预培养、侵染时间、共培养时间的确定 | 第53-54页 |
| ·关于抗性植株 | 第54页 |
| ·后续工作思路 | 第54-57页 |
| 6 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65-71页 |
| 导师组意见 | 第71-72页 |
