摘要 | 第4-5页 |
Abstract | 第5页 |
英文缩略词 | 第6-7页 |
目录 | 第7-10页 |
第1章 绪论 | 第10-14页 |
1.1 研究背景 | 第10-11页 |
1.2 国内外研究进展 | 第11-12页 |
1.3 本研究的目的与意义 | 第12-14页 |
第2章 小鼠肝再生模型的建立 | 第14-20页 |
2.1 实验材料 | 第14页 |
2.1.1 实验动物 | 第14页 |
2.1.2 实验仪器 | 第14页 |
2.1.3 实验器材 | 第14页 |
2.2 实验方法 | 第14-17页 |
2.2.1 2/3 肝切除手术操作方法 | 第14-15页 |
2.2.2 样本的收集与制备 | 第15页 |
2.2.3 石蜡组织切片 | 第15-16页 |
2.2.4 BrdU 免疫荧光实验 | 第16-17页 |
2.3 实验结果 | 第17-18页 |
2.3.1 小鼠肝再生情况 | 第17页 |
2.3.2 小鼠肝再生过程中的肝重体重比( liver weight/body weight; LW/BW) | 第17页 |
2.3.3 小鼠肝再生过程中 BrdU 阳性标记细胞情况 | 第17-18页 |
2.4 讨论 | 第18-19页 |
2.5 本章小结 | 第19-20页 |
第3章 获得 Cdh1 条件性敲除小鼠 | 第20-30页 |
3.1 实验材料 | 第20-21页 |
3.1.1 实验试剂与仪器 | 第20-21页 |
3.1.2 实验动物 | 第21页 |
3.2 实验方法 | 第21-27页 |
3.2.1 实验小鼠的获得 | 第21页 |
3.2.2 小鼠杂交图谱 | 第21-22页 |
3.2.3 小鼠基因型鉴定 | 第22页 |
3.2.4 PCR 扩增 | 第22-23页 |
3.2.5 琼脂糖凝胶鉴定 | 第23页 |
3.2.6 组织总 RNA 的提取 | 第23-24页 |
3.2.7 RT-PCR | 第24-26页 |
3.2.8 组织蛋白提取(所有步骤均在冰上进行) | 第26页 |
3.2.9 BCA 法蛋测白浓度 | 第26-27页 |
3.3 实验结果 | 第27-29页 |
3.3.1 基因水平鉴定 | 第27-28页 |
3.3.2 mRNA 水平鉴定 | 第28页 |
3.3.3 蛋白水平鉴定 | 第28-29页 |
3.4 讨论 | 第29页 |
3.5 本章小结 | 第29-30页 |
第4章 Cdh1 在小鼠肝脏再生中的作用 | 第30-56页 |
4.1 实验材料 | 第30-31页 |
4.1.1 实验试剂 | 第30-31页 |
4.1.2 实验仪器 | 第31页 |
4.2 实验方法 | 第31-48页 |
4.2.1 小鼠肝实质细胞分离 | 第31-32页 |
4.2.2 1/4 肝切除实验 | 第32页 |
4.2.3 FACS 检测 BrdU 掺入 | 第32-33页 |
4.2.4 TUNEL Aaasy | 第33-34页 |
4.2.5 pH3 免疫荧光 (冰冻切片) | 第34-35页 |
4.2.6 BrdU 免疫荧光 | 第35-36页 |
4.2.7 HE 染色(石蜡切片) | 第36-37页 |
4.2.8 Western Blot | 第37-39页 |
4.2.9 冰冻切片 | 第39-40页 |
4.2.10 细胞培养 | 第40-42页 |
4.2.11 siRNA 的转染 | 第42-44页 |
4.2.12 细胞总 RNA 的提取 | 第44-45页 |
4.2.13 细胞总蛋白的提取(所有步骤均在冰上进行) | 第45页 |
4.2.14 细胞蛋白浓度测定(BCA 法) | 第45-46页 |
4.2.15 细胞周期测定 | 第46-48页 |
4.3 实验结果 | 第48-55页 |
4.3.1 Cdh1 缺失后肝实质细胞分析 | 第48-49页 |
4.3.2 Cdh1 的缺失将会导致更多的肝实质细胞重新进入细胞周期 | 第49-50页 |
4.3.3 Cdh1 的缺失对最终的肝重体重比没有明显影响 | 第50-51页 |
4.3.4 Cdh1 的缺失不会引起凋亡 | 第51-52页 |
4.3.5 Cdh1 的缺失不会引起更多的肝实质细胞进入 M 期 | 第52页 |
4.3.6 Ras 信号通路的过度激活导致更多的肝实质细胞进入 S 期 | 第52-53页 |
4.3.7 AML12 体外验证实验结果 | 第53-55页 |
4.4 讨论 | 第55页 |
4.5 本章小结 | 第55-56页 |
结论 | 第56-58页 |
参考文献 | 第58-64页 |
攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第64-66页 |
致谢 | 第66页 |