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利用条件性敲除小鼠研究Cdh1在肝脏再生中的作用

摘要第4-5页
Abstract第5页
英文缩略词第6-7页
目录第7-10页
第1章 绪论第10-14页
    1.1 研究背景第10-11页
    1.2 国内外研究进展第11-12页
    1.3 本研究的目的与意义第12-14页
第2章 小鼠肝再生模型的建立第14-20页
    2.1 实验材料第14页
        2.1.1 实验动物第14页
        2.1.2 实验仪器第14页
        2.1.3 实验器材第14页
    2.2 实验方法第14-17页
        2.2.1 2/3 肝切除手术操作方法第14-15页
        2.2.2 样本的收集与制备第15页
        2.2.3 石蜡组织切片第15-16页
        2.2.4 BrdU 免疫荧光实验第16-17页
    2.3 实验结果第17-18页
        2.3.1 小鼠肝再生情况第17页
        2.3.2 小鼠肝再生过程中的肝重体重比( liver weight/body weight; LW/BW)第17页
        2.3.3 小鼠肝再生过程中 BrdU 阳性标记细胞情况第17-18页
    2.4 讨论第18-19页
    2.5 本章小结第19-20页
第3章 获得 Cdh1 条件性敲除小鼠第20-30页
    3.1 实验材料第20-21页
        3.1.1 实验试剂与仪器第20-21页
        3.1.2 实验动物第21页
    3.2 实验方法第21-27页
        3.2.1 实验小鼠的获得第21页
        3.2.2 小鼠杂交图谱第21-22页
        3.2.3 小鼠基因型鉴定第22页
        3.2.4 PCR 扩增第22-23页
        3.2.5 琼脂糖凝胶鉴定第23页
        3.2.6 组织总 RNA 的提取第23-24页
        3.2.7 RT-PCR第24-26页
        3.2.8 组织蛋白提取(所有步骤均在冰上进行)第26页
        3.2.9 BCA 法蛋测白浓度第26-27页
    3.3 实验结果第27-29页
        3.3.1 基因水平鉴定第27-28页
        3.3.2 mRNA 水平鉴定第28页
        3.3.3 蛋白水平鉴定第28-29页
    3.4 讨论第29页
    3.5 本章小结第29-30页
第4章 Cdh1 在小鼠肝脏再生中的作用第30-56页
    4.1 实验材料第30-31页
        4.1.1 实验试剂第30-31页
        4.1.2 实验仪器第31页
    4.2 实验方法第31-48页
        4.2.1 小鼠肝实质细胞分离第31-32页
        4.2.2 1/4 肝切除实验第32页
        4.2.3 FACS 检测 BrdU 掺入第32-33页
        4.2.4 TUNEL Aaasy第33-34页
        4.2.5 pH3 免疫荧光 (冰冻切片)第34-35页
        4.2.6 BrdU 免疫荧光第35-36页
        4.2.7 HE 染色(石蜡切片)第36-37页
        4.2.8 Western Blot第37-39页
        4.2.9 冰冻切片第39-40页
        4.2.10 细胞培养第40-42页
        4.2.11 siRNA 的转染第42-44页
        4.2.12 细胞总 RNA 的提取第44-45页
        4.2.13 细胞总蛋白的提取(所有步骤均在冰上进行)第45页
        4.2.14 细胞蛋白浓度测定(BCA 法)第45-46页
        4.2.15 细胞周期测定第46-48页
    4.3 实验结果第48-55页
        4.3.1 Cdh1 缺失后肝实质细胞分析第48-49页
        4.3.2 Cdh1 的缺失将会导致更多的肝实质细胞重新进入细胞周期第49-50页
        4.3.3 Cdh1 的缺失对最终的肝重体重比没有明显影响第50-51页
        4.3.4 Cdh1 的缺失不会引起凋亡第51-52页
        4.3.5 Cdh1 的缺失不会引起更多的肝实质细胞进入 M 期第52页
        4.3.6 Ras 信号通路的过度激活导致更多的肝实质细胞进入 S 期第52-53页
        4.3.7 AML12 体外验证实验结果第53-55页
    4.4 讨论第55页
    4.5 本章小结第55-56页
结论第56-58页
参考文献第58-64页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第64-66页
致谢第66页

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