| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第12-17页 |
| 1.1 ~(13)C代谢流分析 | 第12-15页 |
| 1.1.1 稳态~(13)C代谢流分析 | 第13页 |
| 1.1.2 非稳态~(13)C代谢流分析 | 第13-15页 |
| 1.2 ~(13)C同位素丰度信息检测方法 | 第15页 |
| 1.3 红霉素发酵研究背景 | 第15-16页 |
| 1.4 研究目的、内容和意义 | 第16-17页 |
| 第2章 胞内中间代谢物可靠获取方法的建立 | 第17-33页 |
| 2.1 引言 | 第17-18页 |
| 2.2 材料与方法 | 第18-26页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.2.2 药品与试剂 | 第19-20页 |
| 2.2.3 培养基配方 | 第20页 |
| 2.2.3.1 平板培养基 | 第20页 |
| 2.2.3.2 摇瓶培养基 | 第20页 |
| 2.2.4 红色糖多孢菌的培养 | 第20页 |
| 2.2.4.1 平板培养基培养 | 第20页 |
| 2.2.4.2 摇瓶培养基培养 | 第20页 |
| 2.2.5 菌体干重(DCW) | 第20页 |
| 2.2.6 标准曲线 | 第20-21页 |
| 2.2.7 菌体淬灭方法的探究 | 第21页 |
| 2.2.7.1 有机酸类物质的液氮灭活 | 第21页 |
| 2.2.7.2 磷酸糖类、辅酶A类物质的液氮灭活 | 第21页 |
| 2.2.8 提取方法探究 | 第21-22页 |
| 2.2.8.1 液氮研磨 | 第21-22页 |
| 2.2.8.2 液氮冻融 | 第22页 |
| 2.2.8.3 沸乙醇提取 | 第22页 |
| 2.2.8.4 固相萃取方法 | 第22页 |
| 2.2.9 提取结果检测 | 第22-26页 |
| 2.2.9.1 有机酸类物质 | 第22-24页 |
| 2.2.9.2 磷酸糖类物质 | 第24页 |
| 2.2.9.3 辅酶A类物质 | 第24-26页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第26-32页 |
| 2.3.1 标准曲线 | 第26-30页 |
| 2.3.1.1 有机酸类物质的标准曲线 | 第26页 |
| 2.3.1.2 磷酸糖类物质的标准曲线 | 第26-28页 |
| 2.3.1.3 辅酶A类物质的标准曲线 | 第28-30页 |
| 2.3.2 提取方法比较 | 第30-31页 |
| 2.3.3 淬灭方法和提取方法选取 | 第31-32页 |
| 2.4 小结 | 第32-33页 |
| 第3章 胞内中间代谢物同位素丰度检测方法的建立 | 第33-51页 |
| 3.1 引言 | 第33-35页 |
| 3.2 材料与方法 | 第35-39页 |
| 3.2.1 试剂和仪器 | 第35-36页 |
| 3.2.2 流动相及色谱条件 | 第36-37页 |
| 3.2.2.1 有机酸类物质分离流动相与洗脱梯度 | 第36页 |
| 3.2.2.2 磷酸糖类物质分离流动相与洗脱梯度 | 第36-37页 |
| 3.2.2.3 辅酶A类物质分离流动相与洗脱梯度 | 第37页 |
| 3.2.3 色谱优化 | 第37页 |
| 3.2.4 质谱条件 | 第37-38页 |
| 3.2.5 方法验证 | 第38页 |
| 3.2.6 自然标记校正 | 第38-39页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第39-50页 |
| 3.3.1 色谱操作条件优化 | 第39-41页 |
| 3.3.2 质谱操作条件优化 | 第41页 |
| 3.3.3 检测方法设置 | 第41-45页 |
| 3.3.3.1 “一对一”法的设置 | 第41-43页 |
| 3.3.3.2 “一对多”法的设置 | 第43-45页 |
| 3.3.3.3 辅酶A类的单级质谱选择离子模式设置 | 第45页 |
| 3.3.4 检测方法性能考察 | 第45-50页 |
| 3.4 小结 | 第50-51页 |
| 第4章 红霉素发酵过程标记实验应用验证 | 第51-74页 |
| 4.1 引言 | 第51-52页 |
| 4.2 材料与方法 | 第52-59页 |
| 4.2.1 菌种 | 第52-53页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第53页 |
| 4.2.3 药品与试剂 | 第53-54页 |
| 4.2.4 培养基配方及溶液 | 第54-56页 |
| 4.2.4.1 平板培养基 | 第54页 |
| 4.2.4.2 摇瓶种子培养基 | 第54页 |
| 4.2.4.3 发酵合成培养基 | 第54页 |
| 4.2.4.4 发酵复合培养基 | 第54页 |
| 4.2.4.5 微量元素溶液 | 第54-55页 |
| 4.2.4.6 发酵合成培养基葡萄糖溶液 | 第55页 |
| 4.2.4.7 1位碳标记丙酸钠溶液 | 第55页 |
| 4.2.4.8 0.9%氯化钠水溶液 | 第55页 |
| 4.2.4.9 2M盐酸溶液 | 第55页 |
| 4.2.4.10 6M氢氧化钠溶液 | 第55页 |
| 4.2.4.11 合成培养基补料2M氢氧化钠溶液 | 第55页 |
| 4.2.4.12 磷酸氢二钾缓冲液 | 第55页 |
| 4.2.4.13 复合培养基补料30%葡萄糖溶液 | 第55页 |
| 4.2.4.14 复合培养基补料50%丙酸钠溶液 | 第55页 |
| 4.2.4.15 红霉素HPLC分析流动相 | 第55页 |
| 4.2.4.16 丙酸钠HPLC分析流动相 | 第55-56页 |
| 4.2.5 红色糖多孢菌的培养 | 第56-57页 |
| 4.2.5.1 红色糖多孢菌在平板上培养基 | 第56页 |
| 4.2.5.2 红色糖多孢菌培养在摇瓶中培养基 | 第56页 |
| 4.2.5.3 稳态~(13)C标记实验 | 第56页 |
| 4.2.5.4 非稳态~(13)C同位素标记实验 | 第56-57页 |
| 4.2.6 菌体淬灭和胞内代谢物提取方法 | 第57页 |
| 4.2.7 分析测定方法 | 第57-59页 |
| 4.2.7.1 菌体干重(DCW) | 第57-58页 |
| 4.2.7.2 发酵培养基中葡萄糖浓度的测定 | 第58页 |
| 4.2.7.3 发酵液中红霉素浓度的测定 | 第58页 |
| 4.2.7.4 发酵液中丙酸钠浓度的测定 | 第58-59页 |
| 4.2.7.5 红色糖多孢菌胞内中间代谢物同位素丰度信息的测定 | 第59页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第59-72页 |
| 4.3.1 稳态~(13)C标记实验 | 第59-62页 |
| 4.3.1.1 子离子含碳且碳链较短类物质的检测 | 第60页 |
| 4.3.1.2 子离子不含碳类物质的检测 | 第60-61页 |
| 4.3.1.3 子离子含碳原子且碳链较长的物质的检测 | 第61-62页 |
| 4.3.2 非稳态~(13)C标记实验 | 第62-72页 |
| 4.3.2.1 细胞生长 | 第62-63页 |
| 4.3.2.2 葡萄糖消耗 | 第63-65页 |
| 4.3.2.3 产物生成 | 第65-67页 |
| 4.3.2.4 氧气消耗和二氧化碳生成 | 第67页 |
| 4.3.2.5 丙酸钠消耗 | 第67-69页 |
| 4.3.2.6 正丙醇代谢去向 | 第69-72页 |
| 4.4 小结 | 第72-74页 |
| 第五章 结论与展望 | 第74-76页 |
| 5.1 结论 | 第74-75页 |
| 5.2 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 附录一 | 第84-88页 |
| 附录二 | 第88-94页 |
| 附录三 | 第94-98页 |
