| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1.1 细菌的分泌系统 | 第10-11页 |
| 1.2 细菌的外膜囊泡 | 第11-15页 |
| 1.2.1 外膜囊泡的结构 | 第11-12页 |
| 1.2.2 外膜囊泡的生物合成机制 | 第12-14页 |
| 1.2.3 外膜囊泡的基本生物学功能 | 第14-15页 |
| 1.3 细菌外膜囊泡分泌的毒力因子 | 第15-16页 |
| 1.4 细菌外膜囊泡转运不同毒力因子的鉴定方法 | 第16-17页 |
| 1.4.1 质谱分析法 | 第16-17页 |
| 1.4.2 免疫印迹法 | 第17页 |
| 1.4.3 免疫电镜法 | 第17页 |
| 1.5 细菌外膜囊泡的内吞途径和胞内运输 | 第17-20页 |
| 1.5.1 细菌外膜囊泡进入宿主细胞的途径 | 第17-19页 |
| 1.5.2 细菌外膜囊泡在胞内的运输 | 第19-20页 |
| 1.6 本课题的研究内容及意义 | 第20-21页 |
| 第2章 杀鱼爱德华氏菌外膜囊泡的提取与分析 | 第21-28页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.2.1 菌株 | 第21页 |
| 2.2.2 药品与试剂 | 第21页 |
| 2.2.3 培养基 | 第21-22页 |
| 2.2.4 仪器与技术服务 | 第22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-23页 |
| 2.3.1 外膜囊泡的提取 | 第22页 |
| 2.3.2 Bradford法测定外膜囊泡的蛋白浓度 | 第22-23页 |
| 2.3.3 电镜观察外膜囊泡 | 第23页 |
| 2.3.4 外膜囊泡产生的动力学 | 第23页 |
| 2.3.5 外膜囊泡的蛋白组分分析 | 第23页 |
| 2.4 实验结果 | 第23-25页 |
| 2.4.1 外膜囊泡电镜观察 | 第23-24页 |
| 2.4.2 密度梯度离心后外膜囊泡检测 | 第24页 |
| 2.4.3 外膜囊泡产生动力学 | 第24-25页 |
| 2.4.4 外膜囊泡的蛋白组分谱分析 | 第25页 |
| 2.5 讨论 | 第25-27页 |
| 2.6 本章小结 | 第27-28页 |
| 第3章 杀鱼爱德华氏菌外膜囊泡分泌型细菌毒力因子的筛选 | 第28-38页 |
| 3.1 引言 | 第28页 |
| 3.2 实验材料 | 第28-29页 |
| 3.2.1 菌株与培养基 | 第28页 |
| 3.2.2 药品与试剂 | 第28-29页 |
| 3.2.3 仪器与技术服务 | 第29页 |
| 3.3 实验方法 | 第29-31页 |
| 3.3.1 质谱分析实验 | 第29-30页 |
| 3.3.2 外膜囊泡分泌毒力因子免疫印迹筛选 | 第30页 |
| 3.3.3 免疫印迹实验方法 | 第30-31页 |
| 3.4 实验结果 | 第31-36页 |
| 3.4.1 通过质谱法分析外膜囊泡所携带的细菌毒力因子 | 第31-36页 |
| 3.4.2 从胞内转运的效应物中筛选依赖外膜囊泡传递的毒力因子 | 第36页 |
| 3.5 讨论 | 第36-37页 |
| 3.6 本章小结 | 第37-38页 |
| 第4章 杀鱼爱德华氏菌外膜囊泡内吞途径及胞内运输 | 第38-45页 |
| 4.1 引言 | 第38页 |
| 4.2 实验材料 | 第38-39页 |
| 4.2.1 菌株,细胞及培养基 | 第38页 |
| 4.2.2 药品与试剂 | 第38-39页 |
| 4.2.3 仪器设备 | 第39页 |
| 4.3 实验方法 | 第39-40页 |
| 4.3.1 外膜囊泡内化免疫荧光实验 | 第39-40页 |
| 4.3.2 外膜囊泡内吞抑制剂处理实验 | 第40页 |
| 4.3.3 外膜囊泡定位分析免疫荧光实验 | 第40页 |
| 4.4 实验结果 | 第40-43页 |
| 4.4.1 外膜囊泡随时间的内化过程 | 第40页 |
| 4.4.2 外膜囊泡依赖dynamin的内吞方式 | 第40-41页 |
| 4.4.3 外膜囊泡在细胞内的小泡运输 | 第41-43页 |
| 4.5 讨论 | 第43-44页 |
| 4.6 本章小结 | 第44-45页 |
| 第5章 溶血素对杀鱼爱德华氏菌外膜囊泡胞内运输过程的影响 | 第45-53页 |
| 5.1 引言 | 第45页 |
| 5.2 实验材料 | 第45页 |
| 5.3 实验方法 | 第45-47页 |
| 5.3.1 溶血素过表达株免疫印迹和溶血活性鉴定实验 | 第45-46页 |
| 5.3.2 蛋白酶K处理外膜囊泡的实验 | 第46页 |
| 5.3.3 免疫荧光分析溶血素对外膜囊泡的内化及胞内运输实验 | 第46页 |
| 5.3.4 细胞内LPS的检测 | 第46-47页 |
| 5.3.5 细胞毒性LDH检测 | 第47页 |
| 5.4 实验结果 | 第47-51页 |
| 5.4.1 溶血素过表达菌株的鉴定 | 第47-48页 |
| 5.4.2 溶血素在外膜囊泡中的定位 | 第48页 |
| 5.4.3 溶血素对外膜囊泡内化的影响 | 第48页 |
| 5.4.4 溶血素对外膜囊泡胞内运输的影响 | 第48-50页 |
| 5.4.5 溶血素促进宿主caspase-4受体识别外膜囊泡中的LPS | 第50-51页 |
| 5.5 讨论 | 第51-52页 |
| 5.6 本章小结 | 第52-53页 |
| 第6章 结论与展望 | 第53-55页 |
| 6.1 结论 | 第53-54页 |
| 6.2 展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 论文发表 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
