| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 主要缩略语表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-32页 |
| 1 脂肪细胞分化与调控 | 第14-21页 |
| 1.1 脂肪细胞的起源 | 第14-15页 |
| 1.2 脂肪细胞的分化过程 | 第15-17页 |
| 1.3 脂肪细胞的分化调控 | 第17-21页 |
| 1.3.1 过氧化物酶体增殖物激活受体 | 第17-18页 |
| 1.3.2 CCAAT增强子结合蛋白 | 第18-19页 |
| 1.3.3 固醇调节元件结合蛋白 | 第19-20页 |
| 1.3.4 其他脂肪细胞分化相关转录因子 | 第20-21页 |
| 2 KLF家族与脂肪细胞分化 | 第21-32页 |
| 2.1 KLF家族因子概述 | 第21页 |
| 2.2 KLF家族因子的结构特征 | 第21-23页 |
| 2.3 KLF家族因子的功能特征 | 第23-24页 |
| 2.4 KLF家族因子与脂肪细胞分化调控 | 第24-32页 |
| 2.4.1 正调控脂肪细胞分化的KLF因子 | 第24-29页 |
| 2.4.2 负调控脂肪细胞分化的KLF因子 | 第29-32页 |
| 第二章 研究目的和意义 | 第32-34页 |
| 第三章 猪KLF家族基因克隆、染色体定位和进化分析 | 第34-62页 |
| 1 前言 | 第34页 |
| 2 实验材料与试剂 | 第34-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第34页 |
| 2.1.2 组织样品采集 | 第34-35页 |
| 2.1.3 菌株及其它材料 | 第35页 |
| 2.2 主要试剂、仪器及溶液配制 | 第35-36页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第35页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第35-36页 |
| 2.2.3 主要溶液配制 | 第36页 |
| 3 实验方法 | 第36-45页 |
| 3.1 DNA/RNA提取和cDNA制备 | 第36-38页 |
| 3.1.1 基因组DNA提取 | 第36-37页 |
| 3.1.2 组织样品总RNA提取 | 第37页 |
| 3.1.3 总RNA纯化 | 第37-38页 |
| 3.1.4 总RNA含量及纯度测定 | 第38页 |
| 3.1.5 逆转录制备cDNA第一链 | 第38页 |
| 3.2 DNA/cDNA片段的克隆和测序 | 第38-41页 |
| 3.2.1 PCR反应体系 | 第39页 |
| 3.2.2 PCR反应条件 | 第39页 |
| 3.2.3 目的条带的纯化 | 第39-40页 |
| 3.2.4 目的条带的TA克隆 | 第40-41页 |
| 3.2.5 菌落PCR筛选阳性克隆 | 第41页 |
| 3.2.6 重组质粒双酶切验证 | 第41页 |
| 3.2.7 测序验证 | 第41页 |
| 3.3 猪KLF家族基因的克隆 | 第41-42页 |
| 3.3.1 猪KLF家族基因cDNA片断的克隆 | 第41-42页 |
| 3.3.2 RACE方法获取猪KLF基因全长cDNA | 第42页 |
| 3.3.3 猪KLF家族基因基因组序列的获取 | 第42页 |
| 3.4 猪KLF基因的染色体定位 | 第42-44页 |
| 3.4.1 体细胞辐射杂种克隆板定位方法 | 第42-44页 |
| 3.4.2 电子定位方法 | 第44页 |
| 3.5 KLF家族基因分子特性和系统进化分析 | 第44-45页 |
| 3.5.1 数据收集 | 第44-45页 |
| 3.5.2 序列分析 | 第45页 |
| 3.5.3 序列多重比对和系统进化树构建 | 第45页 |
| 4 结果与分析 | 第45-60页 |
| 4.1 猪KLF家族基因cDNA序列的克隆与分析 | 第45-49页 |
| 4.2 猪KLF家族基因基因组序列的克隆与分析 | 第49-51页 |
| 4.3 猪KLF家族基因染色体定位 | 第51-54页 |
| 4.3 KLF家族基因进化分析 | 第54-59页 |
| 4.4 KLF家族因子锌指结构域分析 | 第59-60页 |
| 5 小结 | 第60-62页 |
| 第四章 KLF4基因结构与进化分析 | 第62-80页 |
| 1 前言 | 第62页 |
| 2 实验材料与试剂 | 第62-63页 |
| 2.1 实验材料 | 第62页 |
| 2.2 实验试剂 | 第62-63页 |
| 3 实验方法 | 第63-64页 |
| 3.1 RNA提取和cDNA制备 | 第63页 |
| 3.2 KLF4基因差异剪切体的鉴定 | 第63页 |
| 3.3 KLF4基因结构与进化分析 | 第63-64页 |
| 3.3.1 数据收集 | 第63-64页 |
| 3.3.2 序列分析 | 第64页 |
| 3.3.3 序列多重比对和系统进化树构建 | 第64页 |
| 4 结果与分析 | 第64-79页 |
| 4.1 KLF4基因系统发生特点 | 第64-69页 |
| 4.2 KLF4基因组结构分析 | 第69-73页 |
| 4.3 KLF4基因启动子分析 | 第73-74页 |
| 4.4 KLF4基因选择性剪切分析 | 第74-75页 |
| 4.5 KLF4基因加尾信号的多样性 | 第75-76页 |
| 4.6 KLF4假基因分析 | 第76-79页 |
| 5 小结 | 第79-80页 |
| 第五章 KLF15在脂肪细胞分化中的调控作用 | 第80-90页 |
| 1 前言 | 第80页 |
| 2 实验材料与试剂 | 第80-82页 |
| 2.1 实验材料 | 第80页 |
| 2.2 主要试剂、仪器及溶液配制 | 第80-82页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第80-81页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第81页 |
| 2.2.3 主要溶液配制 | 第81-82页 |
| 3 实验方法 | 第82-87页 |
| 3.1 细胞培养 | 第82页 |
| 3.1.1 3T3-L1前脂肪细胞的培养及传代 | 第82页 |
| 3.1.2 3T3-L1前脂肪细胞分化 | 第82页 |
| 3.2 定量PCR | 第82-83页 |
| 3.2.1 定量PCR引物的设计 | 第82-83页 |
| 3.2.2 定量PCR扩增条件 | 第83页 |
| 3.3 基因表达载体和启动子载体的构建 | 第83-84页 |
| 3.4 质粒的大量提取 | 第84-85页 |
| 3.5 细胞转染 | 第85-86页 |
| 3.6 荧光素酶活性测定 | 第86页 |
| 3.7 数据统计分析 | 第86-87页 |
| 4 结果与分析 | 第87-88页 |
| 4.1 脂肪细胞分化过程中KLF15、PPARг2基因表达水平 | 第87页 |
| 4.2 KLF15因子调控PPARг2基因启动子活性的机理研究 | 第87-88页 |
| 5 小结 | 第88-90页 |
| 第六章 结论、创新点与不足之处 | 第90-92页 |
| 1 结论 | 第90-91页 |
| 2 创新点 | 第91页 |
| 3 不足之处 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-105页 |
| 研究生期间论文发表情况 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 附录 | 第107-113页 |
