| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 英文缩略词表 | 第6-14页 |
| 第1章 前言 | 第14-38页 |
| 1.1 聚羟基脂肪酸酯（PHA） | 第14-17页 |
| 1.1.1 PHA概述 | 第14-15页 |
| 1.1.2 PHA的物化性质 | 第15-16页 |
| 1.1.3 PHA的生物学功能 | 第16-17页 |
| 1.2 组织工程 | 第17-18页 |
| 1.3 PHA在组织工程上的应用 | 第18-21页 |
| 1.4 生物材料表面拓扑结构对细胞生长的影响 | 第21-23页 |
| 1.4.1 材料表面的拓扑结构 | 第21-22页 |
| 1.4.2 材料表面的亲水/疏水性 | 第22页 |
| 1.4.3 材料表面自由能 | 第22页 |
| 1.4.4 材料表面电荷 | 第22-23页 |
| 1.4.5 材料表面的分子修饰 | 第23页 |
| 1.5 从细胞分子水平上分析材料对细胞生长的影响 | 第23-24页 |
| 1.6 生物材料在组织工程应用中的不良反应 | 第24-26页 |
| 1.6.1 感染 | 第24-25页 |
| 1.6.2 肿瘤 | 第25-26页 |
| 1.6.3 钙化 | 第26页 |
| 1.7 细胞外基质与细胞的关系 | 第26-31页 |
| 1.7.1 细胞外基质 | 第26-27页 |
| 1.7.2 细胞黏附 | 第27页 |
| 1.7.3 整合素 | 第27-28页 |
| 1.7.4 粘着斑 | 第28-29页 |
| 1.7.5 黏着斑激酶 | 第29-30页 |
| 1.7.6 整合素与细胞增殖 | 第30-31页 |
| 1.8 端粒、端粒酶、ALT及肿瘤发生 | 第31-36页 |
| 1.8.1 端粒的结构及功能 | 第31-33页 |
| 1.8.2 端粒酶的结构及功能 | 第33页 |
| 1.8.3 端粒长度的延长机制 | 第33-36页 |
| 1.8.3.1 依赖端粒酶的端粒长度维持机制 | 第33-34页 |
| 1.8.3.2 端粒延长替代机制 | 第34-35页 |
| 1.8.3.3 端粒长度的负反馈机制 | 第35-36页 |
| 1.8.4 端粒与肿瘤发生 | 第36页 |
| 1.9 论文目的和意义 | 第36-38页 |
| 第2章 材料与方法 | 第38-64页 |
| 2.1 动物 | 第38页 |
| 2.2 主要试剂 | 第38-42页 |
| 2.2.1 成骨细胞分离及细胞培养试剂 | 第38-39页 |
| 2.2.2 免疫组化试剂 | 第39页 |
| 2.2.3 Western blot试剂 | 第39-40页 |
| 2.2.4 抗体相关产品 | 第40页 |
| 2.2.5 细胞RNA提取相关试剂 | 第40-41页 |
| 2.2.6 Real-time PCR相关试剂 | 第41页 |
| 2.2.7 常用试剂盒 | 第41页 |
| 2.2.8 分子量标准物 | 第41-42页 |
| 2.3 仪器与设备 | 第42-43页 |
| 2.4 常用试剂配方 | 第43-46页 |
| 2.5 实验方法 | 第46-64页 |
| 2.5.1 动物饲养 | 第46页 |
| 2.5.1.1 饲养条件 | 第46页 |
| 2.5.1.2 动物配种 | 第46页 |
| 2.5.2 细胞培养 | 第46-47页 |
| 2.5.2.1 细胞培养及传代 | 第46-47页 |
| 2.5.2.2 细胞冻存 | 第47页 |
| 2.5.2.3 细胞复苏 | 第47页 |
| 2.5.3 SD乳鼠成骨细胞分离及鉴定 | 第47-49页 |
| 2.5.3.1 成骨细胞分离 | 第47-48页 |
| 2.5.3.2 成骨细胞的纯化 | 第48页 |
| 2.5.3.3 骨细胞碱性磷酸酶（ALP）细胞鉴定 | 第48-49页 |
| 2.5.4 材料成膜 | 第49页 |
| 2.5.5 扫描电子显微镜（Scanning electron microscopy, SEM） | 第49-50页 |
| 2.5.5.1 膜表面形态分析 | 第49页 |
| 2.5.5.2 细胞形态分析 | 第49-50页 |
| 2.5.6 CCK-8 检测细胞黏附/增殖能力 | 第50页 |
| 2.5.7 BrdU染色分析细胞增殖能力 | 第50-51页 |
| 2.5.8 免疫荧光染色 | 第51页 |
| 2.5.9 流式细胞仪分析 | 第51-52页 |
| 2.5.9.1 流式细胞仪分析细胞周期 | 第51-52页 |
| 2.5.9.2 流式细胞仪分析细胞DNA异倍体 | 第52页 |
| 2.5.9.3 流式细胞仪分析细胞凋亡 | 第52页 |
| 2.5.10 Western blot检测细胞蛋白表达 | 第52-56页 |
| 2.5.10.1 蛋白样品制备 | 第52-53页 |
| 2.5.10.2 BCA法检测蛋白浓度 | 第53页 |
| 2.5.10.3 SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳） | 第53-54页 |
| 2.5.10.4 转膜 | 第54页 |
| 2.5.10.5 免疫杂交反应 | 第54-55页 |
| 2.5.10.6 化学发光检测 | 第55页 |
| 2.5.10.7 PVDF膜蛋白重使用 | 第55-56页 |
| 2.5.11 Real-time PCR | 第56-58页 |
| 2.5.11.1 细胞总RNA提取 | 第56页 |
| 2.5.11.2 反转录反应 | 第56-57页 |
| 2.5.11.3 Real-time PCR扩增(SYBR Green染料法） | 第57-58页 |
| 2.5.12 SYBR Green Real-time PCR 检测细胞端粒相对长度 | 第58-61页 |
| 2.5.12.1 细胞基因组DNA提取 | 第58-60页 |
| 2.5.12.2 Real-time PCR扩增（SYBR Green 染料法） | 第60-61页 |
| 2.5.13 端粒酶活力检测 | 第61-63页 |
| 2.5.13.1 端粒酶提取 | 第61-62页 |
| 2.5.13.2 端粒重复序列的扩增 | 第62页 |
| 2.5.13.3 ELlSA定量检测 | 第62-63页 |
| 2.5.14 统计学分析 | 第63-64页 |
| 第3章 大鼠成骨细胞的分离鉴定 | 第64-69页 |
| 3.1 成骨细胞形态学观察 | 第64页 |
| 3.2 碱性磷酸酶（ALP）染色观察 | 第64-65页 |
| 3.3 骨钙蛋白免疫荧光染色观察 | 第65页 |
| 3.4 成骨细胞纯化检测 | 第65-67页 |
| 3.5 讨论 | 第67-68页 |
| 3.6 小结 | 第68-69页 |
| 第4章 基于PHA基质上的细胞活力检测 | 第69-75页 |
| 4.1 PHA材料的表面形态分析 | 第69页 |
| 4.2 原代成骨细胞在生物材料膜上的黏附检测 | 第69-72页 |
| 4.3 原代成骨细胞在生物材料膜上的增殖能力检测 | 第72页 |
| 4.4 讨论 | 第72-73页 |
| 4.5 小结 | 第73-75页 |
| 第5章 基于PHA基质上的细胞黏附和增殖调控 | 第75-94页 |
| 5.1 细胞周期分析 | 第75-77页 |
| 5.1.1 成骨细胞在材料基质上的细胞周期变化 | 第75-77页 |
| 5.1.2 讨论与小结 | 第77页 |
| 5.2 细胞凋亡分析 | 第77-79页 |
| 5.2.1 成骨细胞在材料基质上的细胞凋亡分析 | 第78-79页 |
| 5.2.2 讨论与小结 | 第79页 |
| 5.3 材料基质对细胞形态的影响 | 第79-82页 |
| 5.3.1 材料基质上的细胞形态 | 第79-81页 |
| 5.3.2 讨论与小结 | 第81-82页 |
| 5.4 材料基质上细胞的整合素（integrin）表达 | 第82-85页 |
| 5.4.1 细胞不同整合素亚基mRNA表达 | 第82-84页 |
| 5.4.2 讨论与小结 | 第84-85页 |
| 5.5 细胞paxillin/vinculin的表达 | 第85-87页 |
| 5.5.1 paxillin/vinculin的表达分析 | 第85-87页 |
| 5.5.2 讨论与小结 | 第87页 |
| 5.6 FAK/pFAK (pY397)的表达 | 第87-90页 |
| 5.6.1 FAK/pFAK (pY397)的表达分析 | 第87-89页 |
| 5.6.2 讨论与小结 | 第89-90页 |
| 5.7 细胞Cyclin D1 的表达 | 第90-91页 |
| 5.7.1 Real-time PCR分析Cyclin D1 mRNA表达 | 第90-91页 |
| 5.7.2 讨论与小结 | 第91页 |
| 5.8 本章小结 | 第91-94页 |
| 第6章 基于PHA基质上的细胞癌变分析 | 第94-109页 |
| 6.1 成骨细胞增殖能力分析 | 第94-97页 |
| 6.1.1 BrdU染色分析细胞的增殖能力 | 第94-96页 |
| 6.1.2 讨论与小结 | 第96-97页 |
| 6.2 癌相关基因的转录水平检测 | 第97-100页 |
| 6.2.1 细胞Ki67 mRNA的转录水平 | 第97-99页 |
| 6.2.2 细胞p53 mRNA的转录水平 | 第99页 |
| 6.2.3 细胞c-Fos mRNA的转录水平 | 第99-100页 |
| 6.2.4 讨论与小结 | 第100页 |
| 6.3 细胞DNA异倍体分析 | 第100-103页 |
| 6.3.1 细胞核形态分析 | 第100-101页 |
| 6.3.2 FCS分析细胞DNA异倍体 | 第101-102页 |
| 6.3.3 讨论与小结 | 第102-103页 |
| 6.4 细胞的端粒酶活性和端粒长度检测 | 第103-108页 |
| 6.4.1 PCR-ELISA分析细胞端粒酶活性 | 第103-104页 |
| 6.4.2 Real-time PCR检测细胞的端粒长度 | 第104-107页 |
| 6.4.2.1 Real-time PCR 测定端粒长度的可行性 | 第105页 |
| 6.4.2.2 不同年龄大鼠成骨细胞的端粒长度分析 | 第105-107页 |
| 6.4.2.3 材料上生长细胞的端粒长度分析 | 第107页 |
| 6.4.3 讨论与小结 | 第107-108页 |
| 6.5 本章小结 | 第108-109页 |
| 第7章 结论 | 第109-112页 |
| 7.1 研究总结 | 第109-110页 |
| 7.2 问题与展望 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-138页 |
| 个人简历及发表论文 | 第138-140页 |
| 致谢 | 第140页 |
