| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-23页 |
| ·甲酸脱氢酶的简介 | 第9-18页 |
| ·甲酸脱氢酶的来源 | 第10页 |
| ·NAD~+依赖型甲酸脱氢酶的结构 | 第10-12页 |
| ·NAD~+依赖型甲酸脱氢酶的氨基酸序列 | 第10-12页 |
| ·NAD~+赖型甲酸脱氢酶的理化性质 | 第12-14页 |
| ·NAD~+依赖型甲酸脱氢酶的催化机制和动力学参数 | 第14-15页 |
| ·对NAD~+依赖型甲酸脱氢酶的酶学改造研究 | 第15页 |
| ·NAD~+依赖型甲酸脱氢酶的辅酶再生系统的利用 | 第15-16页 |
| ·NAD~+依赖型甲酸脱氢酶的主要生产方法 | 第16页 |
| ·NAD~+依赖型甲酸脱氢酶 | 第16-17页 |
| ·NAD~+依赖型甲酸脱氢酶的应用 | 第17-18页 |
| ·NAD~+依赖型甲酸脱氢酶用于辅酶再生的代谢工程平台技术展望 | 第18页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第18-22页 |
| ·大肠杆菌表达系统的组成 | 第18-20页 |
| ·大肠杆菌表达载体的分类 | 第20-21页 |
| ·pET表达系统简介 | 第21-22页 |
| ·论文的立题背景及研究内容 | 第22-23页 |
| ·立题背景 | 第22页 |
| ·研究内容 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-37页 |
| ·实验材料 | 第23-28页 |
| ·菌株与质粒 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·主要仪器和设备 | 第24-25页 |
| ·培养基和溶液的配制方法 | 第25-28页 |
| ·实验方法与步骤 | 第28-37页 |
| ·三种酵母中FDH片段的扩增 | 第28页 |
| ·PCR产物割胶纯化的具体步骤 | 第28-29页 |
| ·DNA纯度和浓度的测定 | 第29页 |
| ·甲酸脱氢酶基因的克隆及序列分析 | 第29-31页 |
| ·重组质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·甲酸脱氢酶基因在E.coli BL21和E.coli Rosetta中的表达 | 第32-33页 |
| ·甲酸脱氢酶(FDH)酶活的测定 | 第33-37页 |
| 3 结果与讨论 | 第37-61页 |
| ·白假丝酵母(C.albicans)和酿酒酵母(S.cerevisiae)甲酸脱氢酶(FDH)基因的克隆 | 第37-46页 |
| ·C.albicans和S.cerevisiae基因组的提取 | 第37页 |
| ·C.albicans FDH基因的扩增和鉴定 | 第37-42页 |
| ·S.cerevisiae FDH基因的扩增和鉴定 | 第42-46页 |
| ·博伊丁假丝酵母C.boidinii的甲酸脱氢酶(FDH)基因的克隆 | 第46-49页 |
| ·C.boidinii FDH基因的扩增和鉴定 | 第46-49页 |
| ·表达载体的构建及分析 | 第49-55页 |
| ·pBBR1MCS-5-fdh的分析 | 第49-50页 |
| ·重组菌株的构建 | 第50-52页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第52页 |
| ·甲酸脱氢酶基因未能表达的原因分析 | 第52页 |
| ·载体pET-28a(+)的特性 | 第52-53页 |
| ·重组质粒的构建 | 第53-54页 |
| ·重组菌的构建 | 第54页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测蛋白表达 | 第54-55页 |
| ·重组菌株诱导条件的优化 | 第55-59页 |
| ·重组菌在LB培养基中的生长曲线 | 第55-56页 |
| ·重组菌诱导开始时间的优化 | 第56页 |
| ·诱导后培养时间的确定 | 第56-57页 |
| ·诱导剂浓度对酶活的影响 | 第57-58页 |
| ·诱导培养温度对酶活的影响 | 第58-59页 |
| ·重组菌中甲酸脱氢酶的酶学特性的研究 | 第59-61页 |
| ·温度对FDH活性的影响分析 | 第59-60页 |
| ·pH对FDH活性的影响分析 | 第60-61页 |
| 4 结论 | 第61-62页 |
| 5 展望 | 第62-63页 |
| 6 参考文献 | 第63-71页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第71-72页 |
| 8 致谢 | 第72页 |
