| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一篇 文献综述 | 第14-40页 |
| 第一章 捻转血矛线虫及捻转血矛线虫病 | 第14-20页 |
| 1 病原学 | 第14-15页 |
| 1.1 虫体形态特征 | 第14页 |
| 1.2 生活史 | 第14-15页 |
| 2 捻转血矛线虫病 | 第15-16页 |
| 2.1 临床症状 | 第15页 |
| 2.2 流行病学 | 第15-16页 |
| 3 捻转血矛线虫的分子生物学研究 | 第16-17页 |
| 3.1 基因组研究 | 第16页 |
| 3.2 蛋白组研究 | 第16-17页 |
| 4 展望 | 第17-18页 |
| 参考文献 | 第18-20页 |
| 第二章 RNA干扰技术 | 第20-34页 |
| 1 RNAi的介绍 | 第20-22页 |
| 2 RNAi的作用机制 | 第22-23页 |
| 3 siRNA的设计 | 第23-24页 |
| 4 RNA干扰的应用 | 第24-28页 |
| 4.1 秀丽新杆线虫 | 第24-25页 |
| 4.2 果蝇 | 第25-26页 |
| 4.3 哺乳动物 | 第26页 |
| 4.4 寄生虫 | 第26-28页 |
| 4.4.1 锥虫 | 第27页 |
| 4.4.2 血吸虫 | 第27页 |
| 4.4.3 捻转血矛线虫 | 第27-28页 |
| 5 小结 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-34页 |
| 第三章 热休克蛋白70和过氧化氢酶的相关研究 | 第34-40页 |
| 1 热休克蛋白70 | 第34页 |
| 2 过氧化氢酶 | 第34-37页 |
| 参考文献 | 第37-40页 |
| 第二篇 试验部分 | 第40-88页 |
| 第四章 捻转血矛线虫热休克蛋白70的基因克隆、原核表达及生物学特性分析 | 第40-62页 |
| 1 材料 | 第41-43页 |
| 1.1 试验动物和虫体 | 第41页 |
| 1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 1.3 菌种和载体 | 第41-42页 |
| 1.4 主要仪器 | 第42页 |
| 1.5 主要溶液试剂的配制 | 第42-43页 |
| 2 方法 | 第43-51页 |
| 2.1 捻转血矛线虫成虫总RNA的提取 | 第43-44页 |
| 2.2 成虫cDNA第一链的合成 | 第44-45页 |
| 2.3 Hsp70基因的引物的设计与合成 | 第45页 |
| 2.4 Hsp70基因的扩增 | 第45-46页 |
| 2.5 pMD19-T-Hsp70重组质粒的构建 | 第46-47页 |
| 2.5.1 Hsp70目标基因片段的回收和纯化 | 第46页 |
| 2.5.2 pMD19-T-Hsp70重组质粒的构建 | 第46页 |
| 2.5.3 转化和鉴定 | 第46-47页 |
| 2.6 重组质粒pET28a-Hsp70的制备 | 第47-48页 |
| 2.6.1 感受态细胞BL21的制备 | 第47-48页 |
| 2.6.2 重组质粒pMD19-T-Hsp70和pET28a的提取 | 第48页 |
| 2.6.3 重组质粒pET28a-Hsp70的构建 | 第48页 |
| 2.6.4 重组质粒pET28a-Hsp70的鉴定 | 第48页 |
| 2.7 重组蛋白Hsp70的表达 | 第48页 |
| 2.8 Hsp70重组蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| 2.9 Hsp70重组蛋白浓度的测定 | 第49页 |
| 2.10 抗血清的制备 | 第49页 |
| 2.11 Western blot分析 | 第49页 |
| 2.12 重组蛋白Hsp70与山羊PBMC的结合 | 第49-50页 |
| 2.13 重组蛋白Hsp70对山羊PBMC分泌NO功能的影响 | 第50页 |
| 2.14 Hsp70在捻转血矛线虫成虫中的定位 | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-58页 |
| 3.1 Hsp70基因的克隆及原核表达 | 第51-53页 |
| 3.1.1 Hsp70基因的扩增 | 第51-52页 |
| 3.1.2 重组表达质粒pET28a-Hsp70的双酶切鉴定 | 第52-53页 |
| 3.2 重组质粒pET28a-Hsp70表达、分布及纯化 | 第53-54页 |
| 3.3 Western blot分析 | 第54-55页 |
| 3.4 重组蛋白Hsp70与山羊PBMC的结合试验 | 第55-56页 |
| 3.5 重组蛋白Hsp70对山羊PBMC分泌NO功能的影响 | 第56-57页 |
| 3.6 Hsp70在捻转血矛线虫成虫中的分布 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 第五章 捻转血矛线虫过氧化氢酶的基因克隆、原核表达及生物学特性分析 | 第62-76页 |
| 1 材料 | 第62页 |
| 2 方法 | 第62-64页 |
| 2.1 捻转血矛线虫成虫cDNA的合成 | 第62-63页 |
| 2.2 catalase基因的引物设计与合成 | 第63页 |
| 2.3 catalase基因的扩增 | 第63页 |
| 2.4 pMD19-T-catalase重组质粒的构建 | 第63页 |
| 2.5 重组质粒pET28a-catalase的构建 | 第63页 |
| 2.6 重组蛋白catalase的表达 | 第63页 |
| 2.7 重组蛋白catalase的纯化、浓度测定及血清制备 | 第63页 |
| 2.8 Western blot分析 | 第63-64页 |
| 2.9 重组蛋白catalase的酶活性分析 | 第64页 |
| 2.10 catalase重组蛋白对山羊PBMC分泌NO功能的影响 | 第64页 |
| 2.11 重组蛋白catalase与山羊PBMC的结合试验 | 第64页 |
| 2.12 catalase在捻转血矛线虫成虫中的定位 | 第64页 |
| 3 结果 | 第64-72页 |
| 3.1 catalase基因的克隆及原核表达 | 第64-66页 |
| 3.1.1 catalase基因的扩增 | 第64-66页 |
| 3.1.2 重组质粒pET28a-catalase的双酶切鉴定 | 第66页 |
| 3.2 重组质粒pET28a-catalase表达、分布及纯化 | 第66-68页 |
| 3.3 Western blot结果 | 第68页 |
| 3.4 重组蛋白catalase在体外酶活性的检测 | 第68-69页 |
| 3.5 重组蛋白catalase对山羊PBMC分泌NO功能的影响 | 第69-70页 |
| 3.6 重组蛋白catalase与山羊PBMC的结合 | 第70-71页 |
| 3.7 catalase在捻转血矛线虫成虫中的分布 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 第六章 应用RNA干扰技术抑制捻转血矛线虫活化第3期幼虫Hsp70基因的转录 | 第76-88页 |
| 1 材料 | 第77-78页 |
| 1.1 试验动物 | 第77页 |
| 1.2 试验材料 | 第77页 |
| 1.3 试剂 | 第77-78页 |
| 1.4 主要仪器 | 第78页 |
| 2 方法 | 第78-82页 |
| 2.1 siRNA的设计及合成 | 第78-79页 |
| 2.2 用于荧光定量PCR的引物 | 第79页 |
| 2.3 siRNA干扰活化3期幼虫 | 第79页 |
| 2.4 干扰后活化3期幼虫总RNA的提取 | 第79页 |
| 2.5 干扰后活化3期幼虫cDNA的合成 | 第79-80页 |
| 2.6 RT-PCR引物扩增效率验证试验 | 第80-81页 |
| 2.7 Hsp70基因RT-PCR反应体系 | 第81页 |
| 2.8 Applied Biosystems 7500反应程序的设定 | 第81-82页 |
| 3 结果 | 第82-83页 |
| 3.1 Hsp70 RT-PCR引物扩增效率验证试验 | 第82页 |
| 3.2 siRNA干扰Hsp70后体外转录水平 | 第82-83页 |
| 4 讨论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-88页 |
| 全文总结 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 论文发表情况 | 第92页 |
