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烟草NtMAX3和NtMAX4基因克隆及RNA干扰研究

摘要第6-7页
Abstract第7-8页
第一章 引言第15-24页
    1.1 控制植物生长发育的相关基因第15-16页
    1.2 独脚金内酯激素调控分枝发育第16-22页
        1.2.1 独脚金内酯介绍第16-17页
        1.2.2 独脚金内酯的合成第17-18页
        1.2.3 独脚金内酯作用第18-20页
        1.2.4 独脚金内酯与其他植物激素对腋芽的影响第20-22页
    1.3 本实验的目的意义、主要内容及技术路线第22-24页
        1.3.1 目的意义第22-23页
        1.3.2 技术路线第23-24页
第二章 烟草中NtMAX3和NtMAX4基因的RACE克隆第24-46页
    2.1 材料第24页
        2.1.1 植物材料第24页
        2.1.2 试剂及仪器第24页
        2.1.3 培养基第24页
    2.2 RNA提取与处理第24-26页
        2.2.1 提取烟草组织RNA第24-25页
        2.2.2 反转录第25-26页
    2.3 RACE克隆NtMAX3和NtMAX4基因的准备第26-28页
        2.3.1 RACE-Ready cDNA的准备第26-27页
        2.3.2 NtMAX3、NtMAX4基因中间片段扩增第27-28页
    2.4 NtMAX3基因 3’-RACE和 5’-RACE的扩增第28-30页
        2.4.1 NtMAX3基因 3’-RACE扩增第28-29页
        2.4.2 NtMAX3基因 5’-RACE扩增第29-30页
    2.5 NtMAX4基因 3’-RACE和 5’-RACE的扩增第30-31页
    2.6 结果分析第31-40页
        2.6.1 NtMAX3基因的结果分析第31-35页
        2.6.2 NtMAX4基因的结果分析第35-40页
    2.7 TCP家族内BRC基因的分析第40-45页
        2.7.1 BRC基因的鉴定第41页
        2.7.2 不同物种内BRC基因的分析第41-45页
    2.8 讨论第45-46页
第三章 NtMAX3和NtMAX4基因的RNA干扰第46-63页
    3.1 主要药品和试剂第46-47页
        3.1.1 试剂第46页
        3.1.2 培养基第46-47页
    3.2 NtMAX3和NtMAX4 基因RNAi载体的构建第47-50页
        3.2.1 NtMAX3、NtMAX4基因RNA干扰片段的扩增第47-48页
        3.2.2 构建NtMAX3及NtMAX4 RNA干扰的入门载体第48-49页
        3.2.3 构建NtMAX3及NtMAX4 RNA干扰表达载体第49-50页
        3.2.4 NtMAX3及NtMAX4 RNA干扰表达载体的酶切验证第50页
    3.3 RNA干扰表达载体的转化烟草第50-51页
        3.3.1 电击法转化农杆菌第50-51页
        3.3.2 农杆菌介导烟草遗传转化第51页
    3.4 RNA干扰植株表达量的分析第51-52页
        3.4.1 引物设计第52页
        3.4.2 荧光定量PCR(qRT-PCR)分析第52页
    3.5 结果与分析第52-62页
        3.5.1 验证NtMAX3 RNA干扰入门载体及表达载体第52-55页
        3.5.2 验证NtMAX4 RNA干扰入门载体及表达载体第55页
        3.5.3 转基因烟草阳性检测第55-57页
        3.5.4 荧光定量结果分析第57-58页
        3.5.5 RNA干扰植株表型调查第58-62页
    3.6 结论第62-63页
第四章 全文结论与展望第63-64页
参考文献第64-69页
致谢第69-70页
作者简历第70页

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