| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 制药废水概述 | 第12-13页 |
| 1.2 β-内酰胺酶简介 | 第13-14页 |
| 1.3 β-内酰胺酶酶活检测方法的选择 | 第14-17页 |
| 1.3.1 紫外分光光度法测定青霉素酶活力 | 第15页 |
| 1.3.2 快速测定 β-内酰胺酶法 | 第15-16页 |
| 1.3.3 羟胺法测定青霉素酶酶活 | 第16-17页 |
| 1.3.4 碘量法测定青霉素酶酶活 | 第17页 |
| 1.4 酶的固定化方法 | 第17-20页 |
| 1.4.1 吸附法 | 第18页 |
| 1.4.2 包埋法 | 第18页 |
| 1.4.3 交联法 | 第18页 |
| 1.4.4 共价结合法 | 第18-19页 |
| 1.4.5 交联酶聚集体 | 第19-20页 |
| 1.5 本课题的研究意义和主要内容 | 第20-22页 |
| 第二章 优势菌株的筛选及鉴定 | 第22-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 样品 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基 | 第22页 |
| 2.1.3 菌株 | 第22页 |
| 2.1.4 实验的主要仪器和设备 | 第22-23页 |
| 2.1.5 实验试剂及相关配制 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法和步骤 | 第24-29页 |
| 2.2.1 优势菌株的筛选 | 第24-25页 |
| 2.2.2 16S rDNA方法鉴定细菌种属 | 第25-26页 |
| 2.2.2.1 细菌基因组DNA提取 | 第25页 |
| 2.2.2.2 PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.2.3 连接、转化 | 第26页 |
| 2.2.2.4 菌落PCR及测序 | 第26页 |
| 2.2.3 微生物菌落形态鉴定 | 第26页 |
| 2.2.4 革兰氏染色 | 第26-27页 |
| 2.2.5 优势细菌药物敏感性鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.5.1 氨苄青霉素（Amp）抗性研究 | 第27页 |
| 2.2.5.2 优势细菌对其他抗生素的敏感性实验 | 第27-28页 |
| 2.2.6 鉴定优势细菌对废水化学需氧量的影响 | 第28-29页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第29-35页 |
| 2.3.1 细菌 16S rDNA鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.2 菌落形态鉴定及革兰氏染色 | 第30-31页 |
| 2.3.3 细菌药物敏感性试验 | 第31-34页 |
| 2.3.3.1 氨苄青霉素（Amp）抗性结果 | 第31-32页 |
| 2.3.3.2 优势细菌对其他抗生素的敏感性实验结果 | 第32-34页 |
| 2.3.4 COD测量结果 | 第34-35页 |
| 2.4 本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 β-内酰胺酶的克隆、表达 | 第36-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第36页 |
| 3.1.2 实验试剂及相关配制 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法和步骤 | 第37-39页 |
| 3.2.1 β-内酰胺酶基因克隆 | 第37页 |
| 3.2.2 β-内酰胺酶的诱导表达 | 第37-38页 |
| 3.2.2.1 鲍曼不动杆菌 β-内酰胺酶的诱导表达 | 第38页 |
| 3.2.2.2 重组菌的药敏试验 | 第38页 |
| 3.2.3 β-内酰胺酶基因合成 | 第38-39页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第39-46页 |
| 3.3.1 β-内酰胺酶基因的克隆 | 第39-40页 |
| 3.3.2 鲍曼不动杆菌 β-内酰胺酶的诱导表达 | 第40-44页 |
| 3.3.3 合成的 β-内酰胺酶的诱导表达 | 第44-46页 |
| 3.4 本章小结 | 第46-47页 |
| 第四章 β-内酰胺酶的固定化研究 | 第47-57页 |
| 4.1 实验试剂及相关配制 | 第47-48页 |
| 4.2 β-内酰胺酶固定化研究 | 第48-50页 |
| 4.2.1 壳聚糖-戊二醛交联法 | 第48页 |
| 4.2.1.1 壳聚糖小球的制备 | 第48页 |
| 4.2.1.2 β-内酰胺酶的固定 | 第48页 |
| 4.2.2 海藻酸钠-戊二醛固定法 | 第48-49页 |
| 4.2.2.1 固定化酶的制备 | 第49页 |
| 4.2.3 交联 β-内酰胺酶聚集体（CLEAs） | 第49-50页 |
| 4.3 交联酶聚集体固定化方法的条件优化 | 第50-51页 |
| 4.3.1 饱和硫酸铵浓度对固定化酶酶活的影响 | 第50页 |
| 4.3.2 饱和硫酸铵用量对固定化酶酶活的影响 | 第50页 |
| 4.3.3 牛血清蛋白（BSA）对固定化酶酶活的影响 | 第50页 |
| 4.3.4 戊二醛终浓度对固定化酶酶活的影响 | 第50页 |
| 4.3.5 温度对固定化酶酶活稳定性的影响 | 第50页 |
| 4.3.6 pH对固定化酶酶活稳定性的影响 | 第50-51页 |
| 4.3.7 固定化酶对废水COD值的影响 | 第51页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第51-56页 |
| 4.4.1 壳聚糖-戊二醛固定法 | 第51页 |
| 4.4.2 海藻酸钠-戊二醛固定法 | 第51-52页 |
| 4.4.3 交联酶聚集体固定法条件摸索 | 第52-56页 |
| 4.4.3.1 饱和硫酸铵浓度对固定化酶酶活的影响 | 第52-53页 |
| 4.4.3.2 饱和硫酸铵用量对固定化酶酶活的影响 | 第53页 |
| 4.4.3.3 牛血清蛋白（BSA）对固定化酶酶活的影响 | 第53-54页 |
| 4.4.3.4 戊二醛终浓度对固定化酶酶活的影响 | 第54页 |
| 4.4.3.5 温度对固定化酶酶活稳定性的影响 | 第54-55页 |
| 4.4.3.6 pH对固定化酶酶活稳定性的影响 | 第55页 |
| 4.4.3.7 固定化酶对废水COD值的影响 | 第55-56页 |
| 4.5 本章小结 | 第56-57页 |
| 第五章 总结与展望 | 第57-62页 |
| 5.1 总结 | 第57-58页 |
| 5.2 展望 | 第58-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 附录 1 | 第70-72页 |
| 攻硕期间的研究成果 | 第72-73页 |
