| 缩略词表Abbreviations | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstracts | 第11-13页 |
| 前言 | 第14-17页 |
| 第一部分 重组免疫毒素rE/CUS的制备 | 第17-32页 |
| 一、材料和方法 | 第17-27页 |
| 1.材料 | 第17-20页 |
| 1.1.载体和菌株 | 第17页 |
| 1.2 主要试剂 | 第17-19页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.方法 | 第20-27页 |
| 2.1 目的片段(AB3349)扩增 | 第20-21页 |
| 2.2 DNA电泳与目的片段回收 | 第21-22页 |
| 2.3 PCR纯化产物与载体酶切 | 第22页 |
| 2.4 目的片段与载体的链接 | 第22页 |
| 2.5 重组质粒pET-32a-rE/CUS的转化 | 第22-23页 |
| 2.6 重组质粒pET-32a-rE/CUS DNA 的提取 | 第23-24页 |
| 2.7 重组质粒pET-32a-rE/CUS 的鉴定 | 第24页 |
| 2.8 重组蛋白的诱导表达 | 第24页 |
| 2.9 重组蛋白的纯化 | 第24-25页 |
| 2.10 重组蛋白的鉴定 | 第25-27页 |
| 二、结果 | 第27-30页 |
| 1.重组免疫毒素rE/CUS融合基因的构建图 | 第27页 |
| 2.CUS、7D12基因的扩增 | 第27-28页 |
| 3.重组质粒 pET-32a-rE/CUS 的鉴定 | 第28-29页 |
| 4.重组蛋白rE/CUS的表达和纯化 | 第29-30页 |
| 5.重组蛋白rE/CUS的鉴定 | 第30页 |
| 三、讨论 | 第30-31页 |
| 四、结论 | 第31-32页 |
| 第二部分 重组免疫毒素rE/CUS的体外抗肿瘤作用研究 | 第32-55页 |
| 一、材料和方法 | 第32-38页 |
| 1.材料 | 第32-33页 |
| 1.1 细胞株 | 第32页 |
| 1.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第33页 |
| 2.方法 | 第33-38页 |
| 2.1 细胞的培养 | 第33-34页 |
| 2.2 各肿瘤细胞株EGFR表达量的检测 | 第34-35页 |
| 2.3 重组免疫毒素rE/CUS的结合活性检测 | 第35页 |
| 2.4 rE/CUS对肿瘤细胞的体外杀伤作用研究 | 第35-36页 |
| 2.5 rE/CUS诱导细胞凋亡的检测 | 第36-37页 |
| 2.6 Western blot 法检测 r E/CUS 对 Hep G2 细胞 PI3K、Akt、m TOR、P70S6K 、 Bax 、 Bcl-2 、 Caspase 9 、 cleaved-caspase 9 、cleaved-caspase 3 蛋白表达水平的影响 | 第37-38页 |
| 2.7 统计分析 | 第38页 |
| 二、结果 | 第38-51页 |
| 1.各细胞株EGFR表达量的检测 | 第38-39页 |
| 2.重组免疫毒素rE/CUS的结合活性检测 | 第39-40页 |
| 3.rE/CUS对肿瘤细胞的体外杀伤作用研究 | 第40-46页 |
| 3.1 检测rE/CUS体外对人肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用 | 第40-42页 |
| 3.2 检测rE/CUS体外对人非小细胞肺癌细胞A549的增殖抑制作用 | 第42-43页 |
| 3.3 检测rE/CUS体外对人大肠癌细胞SW116的增殖抑制作用 | 第43-45页 |
| 3.4 检测rE/CUS体外对人结肠癌细胞SW620的增殖抑制作用 | 第45-46页 |
| 4.rE/CUS诱导细胞凋亡的检测 | 第46-49页 |
| 4.1 rE/CUS对非小细胞肺癌细胞A549凋亡的影响 | 第46-47页 |
| 4.2 rE/CUS对人肝癌细胞HepG2凋亡的影响 | 第47-49页 |
| 5.Western blot法检测rE/CUS对HepG2细胞PI3K、AKT、mTOR、P70S6K、 Bax、Bcl-2、Caspase 9 和cleaved-caspase 3 蛋白表达水平的影响 | 第49-51页 |
| 三、讨论 | 第51-54页 |
| 四、结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 综述 | 第63-77页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
