| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩写词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 丹参概述 | 第11页 |
| 1.2 丹参的化学成分 | 第11-12页 |
| 1.2.1 丹参脂溶性成分 | 第11页 |
| 1.2.2 丹参水溶性成分 | 第11-12页 |
| 1.3 丹参酮生物合成及代谢工程研究现状 | 第12-19页 |
| 1.3.1 丹参酮生物合成途径 | 第12-13页 |
| 1.3.2 丹参酮合成调控策略 | 第13-14页 |
| 1.3.3 植物次生代谢物质的应用与植物ABC转运蛋白研究进展 | 第14-19页 |
| 1.4 本课题研究意义 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 载体及菌种 | 第21页 |
| 2.1.3 购买的试剂、酶及药品等 | 第21-22页 |
| 2.1.4 常用试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-39页 |
| 2.2.1 丹参无菌苗的扩繁 | 第23页 |
| 2.2.2 丹参SmABCL1、SmABCL4 基因的克隆 | 第23-25页 |
| 2.2.3 丹参SmABCL1、SmABCL4 基因ORF的克隆 | 第25页 |
| 2.2.4 SmABCL1、SmABCL4 在丹参根、茎和叶的RT ‐PCR分析 | 第25-26页 |
| 2.2.5 SmABCL1、SmABCL4 的亚细胞定位分析 | 第26-29页 |
| 2.2.6 植物表达载体的构建 | 第29-32页 |
| 2.2.7 农杆菌介导遗传转化 | 第32-33页 |
| 2.2.8 外源基因整合鉴定 | 第33-35页 |
| 2.2.9 转基因丹参发根QRT‐PCR分析 | 第35-36页 |
| 2.2.10 转基因丹参毛状根有效成分检测 | 第36-38页 |
| 2.2.11 统计分析 | 第38-39页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第39-61页 |
| 3.1 SmABCLs基因克隆 | 第39页 |
| 3.2 SmABCL1、SmABCL4 序列的生物信息学分析 | 第39-41页 |
| 3.3 SmABCL1、SmABCL4 亚细胞定位 | 第41-44页 |
| 3.3.1 亚细胞定位表达载体构建 | 第41-43页 |
| 3.3.2 生物信息学分析SmABCL1、SmABCL4 亚细胞定位 | 第43页 |
| 3.3.3 激光扫描共聚焦显微镜观察 | 第43-44页 |
| 3.4 YE诱导丹参毛状根及丹参植株各器官RNA提取 | 第44页 |
| 3.5 诱导表达谱分析 | 第44-46页 |
| 3.6 组织表达谱分析 | 第46页 |
| 3.7 植物表达载体构建 | 第46-49页 |
| 3.7.1 pCAMBIA2300+‐SmABCLs的构建 | 第46-47页 |
| 3.7.2 pCAMBIA2300+‐RNAi‐SmABCLs的构建 | 第47-49页 |
| 3.8 农杆菌C58C1 介导的丹参外植体转化及毛状根获得 | 第49页 |
| 3.9 丹参发根的外源基因整合鉴定 | 第49-51页 |
| 3.9.1 丹参发根的基因组DNA提取 | 第49页 |
| 3.9.2 pCAMBIA2300+‐SmABCL1\pCAMBIA2300+‐SmABCL4 转基因发根的PCR阳性克隆鉴定 | 第49-50页 |
| 3.9.3 pCAMBIA2300‐RNAi‐SmABCLs转基因发根的PCR阳性克隆鉴定 | 第50-51页 |
| 3.10 转基因毛状根的QRT‐PCR分析及丹参酮/丹酚酸检测 | 第51-61页 |
| 3.10.1 SmABCL1 RNAi、SmABCL1 OE转基因毛状根转录水平分析及丹参酮/丹酚酸含量测定 | 第51-57页 |
| 3.10.2 SmABCL4 RNAi、SmABCL4 OE转基因毛状根转录水平分析及丹参酮/丹酚酸含量测定 | 第57-60页 |
| 3.10.3 SmABCL4 过表达和RNA干扰对转基因毛状根生物量的影响 | 第60-61页 |
| 第四章 总结与展望 | 第61-64页 |
| 4.1 研究总结 | 第61-63页 |
| 4.2 研究展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 附件 | 第74页 |
