| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩写词 | 第9-15页 |
| 引言 | 第15-17页 |
| 1 绪论 | 第17-50页 |
| 1.1 刺参养殖现状 | 第17-20页 |
| 1.1.1 刺参的生物学性状及分布 | 第17-18页 |
| 1.1.2 营养和药用价值 | 第18页 |
| 1.1.3 发展刺参产业的经济及生态意义 | 第18页 |
| 1.1.4 制约刺参养殖业发展的瓶颈 | 第18-20页 |
| 1.2 刺参弧菌病与溶藻弧菌 | 第20-23页 |
| 1.2.1 弧菌性疾病 | 第20-21页 |
| 1.2.2 刺参腐皮综合征 | 第21-22页 |
| 1.2.3 溶藻弧菌 | 第22-23页 |
| 1.3 刺参的非特异性免疫 | 第23-25页 |
| 1.3.1 体壁防御 | 第24页 |
| 1.3.2 细胞免疫 | 第24页 |
| 1.3.3 体液免疫 | 第24-25页 |
| 1.3.4 非特异性免疫相关酶 | 第25页 |
| 1.4 噬菌体的发现、分类及生物学 | 第25-34页 |
| 1.4.1 噬菌体的发现及主要里程碑事件 | 第25-26页 |
| 1.4.2 噬菌体的分类 | 第26-31页 |
| 1.4.3 噬菌体的生物学特性 | 第31-34页 |
| 1.5 噬菌体在水产养殖中的生物防控 | 第34-41页 |
| 1.5.1 噬菌体在水产领域中的应用 | 第35-38页 |
| 1.5.2 噬菌体作为生物抗菌制剂在水产领域中应用的优势 | 第38-39页 |
| 1.5.3 噬菌体在水产领域中应用的瓶颈问题及解决方法 | 第39-40页 |
| 1.5.4 噬菌体作为水产动物抗菌剂的安全性 | 第40-41页 |
| 1.6 噬菌体基因组的相关研究 | 第41-49页 |
| 1.6.1 噬菌体的基因组测序 | 第41-46页 |
| 1.6.2 溶藻弧菌噬菌体的全基因组信息 | 第46页 |
| 1.6.3 噬菌体内溶素的研究 | 第46-47页 |
| 1.6.4 噬菌体与宿主菌的协同进化对噬菌体治疗的影响 | 第47-49页 |
| 1.7 本论文的主要研究目的 | 第49-50页 |
| 2 溶藻弧菌及其噬菌体的分离纯化及其特性 | 第50-80页 |
| 2.1 前言 | 第50页 |
| 2.2 实验材料和设备 | 第50-53页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第50-51页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第51页 |
| 2.2.3 引物合成 | 第51-52页 |
| 2.2.4 仪器设备 | 第52-53页 |
| 2.2.5 溶液配制 | 第53页 |
| 2.3 实验方法 | 第53-62页 |
| 2.3.1 溶藻弧菌的分离纯化 | 第53-54页 |
| 2.3.2 溶藻弧菌的形态学鉴定 | 第54页 |
| 2.3.3 溶藻弧菌生理生化指标检测 | 第54页 |
| 2.3.4 分子生物学鉴定 | 第54-56页 |
| 2.3.5 分离株的药敏分析 | 第56-57页 |
| 2.3.6 非溶源性宿主菌株验证 | 第57页 |
| 2.3.7 半数致死量(LD_(50))试验 | 第57-58页 |
| 2.3.8 噬菌体的分离 | 第58-59页 |
| 2.3.9 噬菌体的效价测定 | 第59页 |
| 2.3.10 噬菌体的扩大培养 | 第59-60页 |
| 2.3.11 高纯度噬菌体颗粒的制备 | 第60页 |
| 2.3.12 噬菌体的形态观察 | 第60页 |
| 2.3.13 氯仿敏感性测试 | 第60页 |
| 2.3.14 噬菌体宿主谱的测定 | 第60-61页 |
| 2.3.15 噬菌体一步生长曲线 | 第61页 |
| 2.3.16 体外抑菌实验 | 第61-62页 |
| 2.3.17 噬菌体酸碱耐受性实验 | 第62页 |
| 2.4 实验结果 | 第62-76页 |
| 2.4.1 溶藻弧菌的分离纯化 | 第62-63页 |
| 2.4.2 溶藻弧菌的形态学鉴定 | 第63-64页 |
| 2.4.3 生理生化指标检测 | 第64-66页 |
| 2.4.4 溶藻弧菌的分子生物学鉴定 | 第66-69页 |
| 2.4.5 分离株的药敏分析 | 第69页 |
| 2.4.6 非溶源性宿主菌株验证 | 第69页 |
| 2.4.7 半数致死量(LD_(50))试验结果 | 第69-70页 |
| 2.4.8 溶藻弧菌Z1210裂解性噬菌体的分离 | 第70-71页 |
| 2.4.9 噬菌体透射电镜观察结果 | 第71-72页 |
| 2.4.10 噬菌体氯仿敏感性测试 | 第72页 |
| 2.4.11 噬菌体宿主谱分析 | 第72-73页 |
| 2.4.12 一步生长曲线 | 第73-74页 |
| 2.4.13 噬菌体的体外抑菌实验 | 第74-75页 |
| 2.4.14 噬菌体酸碱耐受实验 | 第75-76页 |
| 2.5 讨论 | 第76-79页 |
| 2.6 小结 | 第79-80页 |
| 3 噬菌体PVA1的全基因组分析及其内溶素基因的克隆表达和活性评价 | 第80-107页 |
| 3.1 前言 | 第80-81页 |
| 3.2 实验材料和设备 | 第81-83页 |
| 3.2.1 噬菌体及细菌 | 第81页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第81-82页 |
| 3.2.3 引物合成 | 第82页 |
| 3.2.4 仪器设备 | 第82页 |
| 3.2.5 溶液配制 | 第82-83页 |
| 3.3 实验方法 | 第83-88页 |
| 3.3.1 噬菌体PVA1基因组DNA的提取 | 第83-84页 |
| 3.3.2 噬菌体PVA1的全基因组测序 | 第84-85页 |
| 3.3.3 噬菌体PVA1的全基因组分析 | 第85页 |
| 3.3.4 噬菌体PVA1内溶素基因gp60的生物信息学分析 | 第85-86页 |
| 3.3.5 噬菌体PVA1内溶素基因的原核表达及蛋白活性的初步验证 | 第86-88页 |
| 3.3.6 数据统计分析 | 第88页 |
| 3.4 实验结果 | 第88-103页 |
| 3.4.1 噬菌体PVA1基因组的提取 | 第88-90页 |
| 3.4.2 噬菌体PVA1基因组碱基组成及开放阅读框预测 | 第90页 |
| 3.4.3 噬菌体PVA1基因组推定基因功能的预测与全基因组结构分析 | 第90-91页 |
| 3.4.4 噬菌体PVA1功能基因比较进化分析 | 第91-96页 |
| 3.4.5 噬菌体PVA1内溶素蛋白质功能及理化特性分析 | 第96-98页 |
| 3.4.6 内溶素信号肽及跨膜区域的预测 | 第98-99页 |
| 3.4.7 内溶素gp60基因编码蛋白的二级结构预测 | 第99-100页 |
| 3.4.8 内溶素gp60基因编码蛋白的三级结构预测 | 第100-101页 |
| 3.4.9 内溶素gp60基因片段的扩增及克隆 | 第101-102页 |
| 3.4.10 重组大肠杆菌初步诱导表达 | 第102页 |
| 3.4.11 浊度法检测重组内溶素的裂解活性 | 第102-103页 |
| 3.5 讨论 | 第103-105页 |
| 3.6 小结 | 第105-107页 |
| 4 噬菌体防控溶藻弧菌感染的效果及对刺参非特异性免疫应答的影响 | 第107-131页 |
| 4.1 前言 | 第107-108页 |
| 4.2 实验材料和设备 | 第108-109页 |
| 4.2.1 实验动物 | 第108页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第108页 |
| 4.2.3 仪器设备 | 第108-109页 |
| 4.2.4 实验用噬菌体和菌株 | 第109页 |
| 4.2.5 饲料原料 | 第109页 |
| 4.3 实验方法 | 第109-114页 |
| 4.3.1 实验用刺参的暂养 | 第109页 |
| 4.3.2 攻毒用溶藻弧菌的制备 | 第109页 |
| 4.3.3 实验用噬菌体的制备 | 第109-110页 |
| 4.3.4 噬菌体对刺参溶藻弧菌浸浴攻毒的保护效果考察 | 第110页 |
| 4.3.5 刺参溶藻弧菌腹腔注射攻毒的噬菌体治疗试验 | 第110-111页 |
| 4.3.6 刺参生存率的测定 | 第111页 |
| 4.3.7 施用噬菌体对攻毒刺参非特异性免疫应答的影响 | 第111页 |
| 4.3.8 溶菌酶(LYZ)活性的测定 | 第111页 |
| 4.3.9 酸性磷酸酶(ACP)活性的测定 | 第111-112页 |
| 4.3.10 过氧化物酶(POD)活性的测定 | 第112页 |
| 4.3.11 一氧化氮合酶(NOS)活性的测定 | 第112页 |
| 4.3.12 饲喂试验的饲料制备 | 第112页 |
| 4.3.13 饲料基础成分分析 | 第112-113页 |
| 4.3.14 刺参的饲喂试验 | 第113页 |
| 4.3.15 刺参生长性能分析 | 第113页 |
| 4.3.16 饲喂试验中刺参体腔液免疫相关酶活的检测 | 第113-114页 |
| 4.3.17 饲喂试验中刺参肠道弧菌数量与溶藻弧菌噬菌体数量的变化 | 第114页 |
| 4.3.18 饲喂试验后的攻毒试验 | 第114页 |
| 4.3.19 数据统计分析 | 第114页 |
| 4.4 实验结果 | 第114-126页 |
| 4.4.1 不同噬菌体最佳保护效果的施用浓度 | 第114-116页 |
| 4.4.2 不同噬菌体与抗生素对溶藻弧菌浸浴攻毒的预防效果 | 第116-117页 |
| 4.4.3 不同噬菌体与抗生素对溶藻弧菌腹腔注射攻毒的治疗效果 | 第117-118页 |
| 4.4.4 刺参体腔液免疫相关酶活性 | 第118-122页 |
| 4.4.5 生长性能 | 第122-123页 |
| 4.4.6 刺参体腔液免疫相关酶活性 | 第123-124页 |
| 4.4.7 饲喂试验中刺参肠道弧菌数量与溶藻弧菌噬菌体数量的变化 | 第124-125页 |
| 4.4.8 抵御病原菌感染的试验结果 | 第125-126页 |
| 4.5 讨论 | 第126-129页 |
| 4.6 小结 | 第129-131页 |
| 5 结论与展望 | 第131-133页 |
| 5.1 结论 | 第131-132页 |
| 5.2 展望 | 第132-133页 |
| 创新点摘要 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-148页 |
| 附录A pET30a-gp60质粒测序结果 | 第148-149页 |
| 作者简介 | 第149页 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第149-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
