| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 1 文献综述 | 第8-14页 |
| 1.1 克氏原螯虾概况 | 第8页 |
| 1.2 肿瘤坏死因子诱导蛋白家族 | 第8-14页 |
| 1.2.1 肿瘤坏死因子诱导蛋白 1 | 第8-9页 |
| 1.2.2 肿瘤坏死因子诱导蛋白 2 | 第9页 |
| 1.2.3 肿瘤坏死因子诱导蛋白 3 | 第9页 |
| 1.2.4 肿瘤坏死因子诱导蛋白 4 | 第9-10页 |
| 1.2.5 肿瘤坏死因子诱导蛋白 5 | 第10页 |
| 1.2.6 肿瘤坏死因子诱导蛋白 6 | 第10页 |
| 1.2.7 肿瘤坏死因子诱导蛋白 8 | 第10-14页 |
| 2 引言 | 第14-16页 |
| 2.1 研究的目的及意义 | 第14页 |
| 2.2 研究内容 | 第14-15页 |
| 2.2.1 TNFAIP8基因序列的克隆及序列分析 | 第14页 |
| 2.2.2 TNFAIP8基因的原核表达 | 第14页 |
| 2.2.3 TNFAIP8重组蛋白相互作用蛋白的筛选 | 第14页 |
| 2.2.4 TNFAIP8基因的组织表达特征分析 | 第14页 |
| 2.2.5 LPS及Poly I:C刺激对TNFAIP8基因的表达的影响 | 第14页 |
| 2.2.6 TNFAIP8基因干扰对免疫相关基因表达的影响 | 第14-15页 |
| 2.2.7 TNFAIP8重组蛋白诱导免疫相关基因的表达 | 第15页 |
| 2.3 技术路线 | 第15-16页 |
| 3 材料与方法 | 第16-29页 |
| 3.1 实验材料 | 第16页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第16-20页 |
| 3.2.1 主要实验仪器 | 第16页 |
| 3.2.2 主要生化试剂 | 第16-17页 |
| 3.2.3 常用溶液的配制 | 第17-20页 |
| 3.3 实验方法 | 第20-29页 |
| 3.3.1 TNFAIP8基因的克隆 | 第20-23页 |
| 3.3.2 TNFAIP8基因的原核表达 | 第23-24页 |
| 3.3.3 重组蛋白的检测及纯化 | 第24-25页 |
| 3.3.4 蛋白定量 | 第25-26页 |
| 3.3.5 TNFAIP8的组织表达特征分析 | 第26-27页 |
| 3.3.6 筛选与TNFAIP8相互作用的蛋白 | 第27-28页 |
| 3.3.7 LPS和PolyI：C刺激对TNFAIP8及其相互作用蛋白表达的影响 | 第28页 |
| 3.3.8 TNFAIP8 RNA干扰对免疫相关基因表达水平的影响 | 第28页 |
| 3.3.9 TNFAIP8重组蛋白刺激对免疫相关基因表达的影响 | 第28-29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-42页 |
| 4.1 总RNA的检测 | 第29页 |
| 4.2 TNFAIP8基因序列分析 | 第29-30页 |
| 4.3 TNFAIP8基因的ORF序列扩增 | 第30-31页 |
| 4.4 原核表达载体的构建 | 第31-33页 |
| 4.4.1 目的片段的克隆鉴定 | 第31-32页 |
| 4.4.2 双酶切鉴定 | 第32页 |
| 4.4.3 菌落PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 4.5 重组TNFAIP8蛋白的表达及纯化 | 第33-34页 |
| 4.5.1 SDS-PAGE检测 | 第33页 |
| 4.5.2 重组蛋白纯化 | 第33-34页 |
| 4.5.3 Western blot分析 | 第34页 |
| 4.6 GST Pull-down方法筛选与TNFAIP8互作的蛋白 | 第34-35页 |
| 4.7 TNFAIP8的表达分析 | 第35-42页 |
| 4.7.1 TNFAIP8基因的组织定量 | 第35-36页 |
| 4.7.2 注射LPS及PolyI:C对TNFAIP8基因的影响 | 第36-38页 |
| 4.7.3 TNFAIP8 RNA干扰对免疫相关基因表达水平的影响 | 第38-40页 |
| 4.7.4 重组TNFAIP8蛋白刺激对免疫相关基因及其互作蛋白基因表达的影响 | 第40-42页 |
| 5 讨论 | 第42-43页 |
| 5.1 克氏原螯虾TNFAIP8的原核表达 | 第42页 |
| 5.2 TNFAIP8相互作用蛋白的筛选鉴定 | 第42页 |
| 5.3 免疫刺激对克氏原螯虾TNFAIP8基因及免疫相关基因表达水平的影响 | 第42-43页 |
| 6 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 个人简介 | 第50页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 | 第50页 |
