| 摘要 | 第8-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第17-43页 |
| 1.1 引言 | 第17-19页 |
| 1.2 农杆菌的研究进展 | 第19-32页 |
| 1.2.1 农杆菌概述 | 第19-21页 |
| 1.2.2 植物渗出物中的农杆菌致病诱导效应物 | 第21-23页 |
| 1.2.3 植物诱导分子的感应与信号转导 | 第23-24页 |
| 1.2.4 农杆菌对植物渗出物的趋化效应 | 第24-28页 |
| 1.2.5 农杆菌致病力的形成 | 第28-31页 |
| 1.2.6 农杆菌致病信号物质的蛋白质组诱导效应 | 第31页 |
| 1.2.7 农杆菌VirD_2和VirE_2蛋白的研究及应用 | 第31-32页 |
| 1.3 农杆菌的宿主植物 | 第32-40页 |
| 1.3.1 农杆菌对植物防御反应的诱导效应 | 第32-33页 |
| 1.3.2 农杆菌对植物悬浮细胞基因表达的静态效应 | 第33-37页 |
| 1.3.3 植物冠瘿瘤 | 第37-40页 |
| 1.4 问题与展望 | 第40-43页 |
| 第2章 拟南芥接种农杆菌GV3101后全基因组转录变化 | 第43-79页 |
| 2.1 研究背景 | 第43页 |
| 2.2 研究目的和意义 | 第43-44页 |
| 2.3 研究内容 | 第44页 |
| 2.4 转录组数据的获得与统计分析及基因功能和代谢途径分布分析 | 第44-46页 |
| 2.4.1 Microarray实验 | 第44-45页 |
| 2.4.2 Microarray数据的获得 | 第45页 |
| 2.4.3 Microarray数据的统计分析方法 | 第45-46页 |
| 2.4.4 差异转录基因的功能分类与代谢途径和通路分布分析 | 第46页 |
| 2.5 结果与分析 | 第46-73页 |
| 2.5.1 拟南芥花梗受伤后差异转录基因的RAM分析及其功能分类与代谢途径和通路分布 | 第46-50页 |
| 2.5.2 拟南芥受伤花梗接种GV3101后第3小时与第6天间差异转录基因的RAM分析及其功能分类与代谢途径和通路分布 | 第50-54页 |
| 2.5.3 接种GV3101后第3小时与第6天间拟南芥接种部位基因转录模式明显改变 | 第54-56页 |
| 2.5.4 接种GV3101后第3小时与第6天间,能量代谢相关途径的基因转录变化根本不同 | 第56-65页 |
| 2.5.5 接种GV3101后第3小时与第6天间的拟南芥接种部位细胞中胁迫反应明显不同 | 第65-69页 |
| 2.5.6 接种GV3101后第3小时与第6天间,拟南芥激素代谢途径基因转录明显改变 | 第69-73页 |
| 2.6 讨论 | 第73-79页 |
| 2.6.1 接种GV3101后伤口愈合过程完全改变 | 第73-75页 |
| 2.6.2 接种GV3101后第6天至第3小时的生理状态改变较小 | 第75页 |
| 2.6.3 接种GV3101后第3小时与第6天间接种部位细胞的抗病能力减弱 | 第75-76页 |
| 2.6.4 农杆菌GV3101通过茉莉酮酸酯代谢相关基因延缓拟南芥伤口的正常愈合并减弱拟南芥感染部位细胞的抗病能力 | 第76-79页 |
| 第3章 冠瘿瘤早期与晚期全基因组转录变化差异 | 第79-127页 |
| 3.1 研究背景 | 第79页 |
| 3.2 研究目的和意义 | 第79-80页 |
| 3.3 研究内容 | 第80页 |
| 3.4 转录组数据的获得与统计分析及基因分类 | 第80-81页 |
| 3.4.1 Microarray实验 | 第80-81页 |
| 3.4.2 Microarray数据的获得 | 第81页 |
| 3.5 结果与分析 | 第81-121页 |
| 3.5.1 冠瘿瘤细胞在幼龄期与成熟期的基因转录静态变化明显不同 | 第81-82页 |
| 3.5.2 幼龄期冠瘿瘤细胞中转录增强的基因数比转录减弱的基因数增加一倍 | 第82-88页 |
| 3.5.3 成熟期冠瘿瘤细胞中转录下调基因多于转录上调基因 | 第88-90页 |
| 3.5.4 幼龄期冠瘿瘤细胞中的差异转录基因与成熟冠瘿瘤细胞中的大不相同 | 第90页 |
| 3.5.5 幼龄期冠瘿瘤细胞中能量代谢大部分差异基因的转录增强,而成熟冠瘿瘤细胞中的转录减弱 | 第90-93页 |
| 3.5.6 幼龄期冠瘿瘤细胞中光合作用的绝大部分差异基因转录增强,而成熟期冠瘿瘤细胞中的则转录减弱 | 第93-97页 |
| 3.5.7 幼龄期冠瘿瘤细胞中核苷酸从头合成的相关基因转录增强,而成熟期酸补救途径的相关基因转录增强 | 第97-102页 |
| 3.5.8 幼龄期冠瘿瘤中DNA合成强于成熟期冠瘿瘤细胞 | 第102页 |
| 3.5.9 成熟期冠瘿瘤细胞比幼龄期的RNA转录调控更加复杂 | 第102-108页 |
| 3.5.10 幼龄期与成熟期的冠瘿瘤细胞蛋白质合成相关基因转录变化差异明显 | 第108-112页 |
| 3.5.11 从幼龄期到成熟期,冠瘿瘤细胞中脂类代谢相关基因转录变化增强 | 第112-118页 |
| 3.5.12 从幼龄期到成熟期,冠瘿瘤细胞中的胁迫反应完全改变 | 第118-120页 |
| 3.5.13 与幼龄期相比,成熟期冠瘿瘤细胞中的信号途径相关基因的转录受到抑制 | 第120-121页 |
| 3.6 讨论 | 第121-127页 |
| 3.6.1 冠瘿瘤细胞从幼龄期到成熟期,代谢方式从自养方式变为异养方式 | 第121-123页 |
| 3.6.2 分析基因芯片的转录差异时,RAM方法优于Fc方法 | 第123-127页 |
| 第4章 VirD_2和VirE_2蛋白的表达 | 第127-153页 |
| 4.1 研究背景 | 第127页 |
| 4.2 研究目的和意义 | 第127-128页 |
| 4.3 技术路线 | 第128页 |
| 4.4 材料 | 第128-130页 |
| 4.4.1 菌种材料 | 第128页 |
| 4.4.2 试剂 | 第128-129页 |
| 4.4.4 常规试剂配方 | 第129-130页 |
| 4.4.5 蛋白质纯化缓冲液 | 第130页 |
| 4.5 主要仪器设备 | 第130页 |
| 4.6 方法 | 第130-134页 |
| 4.6.1 农杆菌培养 | 第130-131页 |
| 4.6.2 大肠杆菌培养 | 第131页 |
| 4.6.3 大肠杆菌感受态制备(CaCl_2法,本实验室修改) | 第131页 |
| 4.6.4 引物设计及PCR扩增条件 | 第131-132页 |
| 4.6.5 目的DNA片段PCR扩增产物的回收与纯化 | 第132页 |
| 4.6.6 目的DNA片段PCR扩增产物连接T载体及其大肠杆菌转化 | 第132页 |
| 4.6.7 阳性克隆的筛选与验证 | 第132-133页 |
| 4.6.8 目的DNA片段的序列分析 | 第133页 |
| 4.6.9 表达载体pEVD_2和pEVE_2的构建 | 第133页 |
| 4.6.10 VirD_2和VirE_2融合蛋白的诱导表达 | 第133页 |
| 4.6.11 VirD_2和VirE_2融合蛋白的纯化 | 第133-134页 |
| 4.7 结果与分析 | 第134-148页 |
| 4.7.1 vird_2基因克隆载体和表达载体的构建 | 第134-141页 |
| 4.7.2 VirD_2融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第141-143页 |
| 4.7.3 vire_2基因克隆载体和表达载体的构建 | 第143-146页 |
| 4.7.4 VirE_2融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第146-148页 |
| 4.8 讨论 | 第148-153页 |
| 第5章 结论 | 第153-155页 |
| 第6章 创新 | 第155-157页 |
| 参考文献 | 第157-175页 |
| 缩略表 | 第175-177页 |
| 致谢 | 第177-179页 |
| 发表论文及参研课题 | 第179页 |
