| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一部分:文献综述 单克隆抗体介导的肺癌靶向治疗 | 第9-15页 |
| 一、杂交瘤(Hybridoma)技术及靶向治疗 | 第9-11页 |
| 1 杂交瘤技术的原理 | 第9-11页 |
| 2 靶向治疗 | 第11页 |
| 二、抗肺癌单抗靶向治疗 | 第11-13页 |
| 1.以Her-2为靶点的治疗 | 第11页 |
| 2.以EGFR为靶点的治疗 | 第11-12页 |
| 3.以VEGF为靶点的治疗 | 第12-13页 |
| 4.多靶点联合治疗 | 第13页 |
| 三、小结和展望 | 第13-15页 |
| 第二部分:实验部分 应用功能性抗体分离鉴定肺癌功能性基因 | 第15-66页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 一、材料与方法 | 第16-30页 |
| (一) 实验材料 | 第16-20页 |
| 1.细胞 | 第16页 |
| 2.组织标本 | 第16页 |
| 3.动物 | 第16-17页 |
| 4.主要试剂 | 第17-18页 |
| 5.主要仪器及材料 | 第18-19页 |
| 6.主要抗体 | 第19-20页 |
| 7.分析软件 | 第20页 |
| (二) 实验方法 | 第20-30页 |
| 1.细胞培养 | 第20页 |
| 2.无血清杂交瘤上清的收集 | 第20页 |
| 3.单克隆抗体类和亚类的检测 | 第20-21页 |
| 4.抗肺癌单克隆抗体的纯化 | 第21页 |
| 5.细胞免疫荧光实验 | 第21页 |
| 6.流式细胞荧光实验 | 第21页 |
| 7.免疫组化实验 | 第21-22页 |
| 8.抗体亲和纯化层析柱的制备 | 第22页 |
| 9.细胞蛋白的提取 | 第22-23页 |
| 10.BCA蛋白定量法 | 第23页 |
| 11.免疫印迹(Western Blot) | 第23页 |
| 12.免疫亲和层析纯化抗原蛋白 | 第23页 |
| 13.免疫沉淀纯化抗原蛋白 | 第23-24页 |
| 14.质谱鉴定 | 第24页 |
| 15.体外抗体阻断抗原基因功能的实验 | 第24-25页 |
| 16.单抗体内抑制肿瘤生长实验 | 第25页 |
| 17.基因水平功能的研究 | 第25-29页 |
| 18.统计分析 | 第29-30页 |
| 二、实验结果与讨论 | 第30-60页 |
| 1.细胞免疫荧光鉴定抗肺癌单克隆抗体 | 第30页 |
| 2.抗肺癌单抗的亚类 | 第30页 |
| 3.抗肺癌单抗的纯化 | 第30-32页 |
| 4.单抗所识别的抗原在多种肺癌细胞系的细胞膜上表达 | 第32-33页 |
| 5.单抗所识别的靶抗原在多种人肺癌细胞系中的表达 | 第33-36页 |
| 6.单抗靶抗原在肺癌组织及其癌旁正常组织中的表达 | 第36-42页 |
| 7.单抗靶抗原在其它常见癌组织及其癌旁正常组织中的表达 | 第42-48页 |
| 8.单抗靶抗原蛋白提取方法的优化与筛选 | 第48-50页 |
| 9.单抗靶抗原蛋白的纯化 | 第50-52页 |
| 10.单抗靶抗原蛋白的MALDI-TOF肽指纹图谱鉴定 | 第52页 |
| 11.抗肺癌单抗2D7质谱结果的验证 | 第52-53页 |
| 12.2D7抗体中和2D7-Ag表达对肺癌细胞的影响 | 第53-54页 |
| (1) 抗体对肺癌细胞增殖的作用 | 第53页 |
| (2) 抗体对肺癌细胞粘附的作用 | 第53-54页 |
| (3) 抗体对肺癌细胞迁移的作用 | 第54页 |
| (4) 抗体对肺癌细胞侵袭的作用 | 第54页 |
| 13.抗体对肺癌移植瘤生长及瘤重的影响 | 第54-55页 |
| 14.siRNA瞬时转染敲降2D7-Ag基因对肺癌细胞功能的作用 | 第55-60页 |
| (1) siRNA序列对2D7-Ag基因敲降效率的检测 | 第56页 |
| (2) siRNA瞬时敲降对肺癌细胞增殖的作用 | 第56-57页 |
| (3) 瞬时敲降2D7-Ag基因对细胞倍增时间的影响 | 第57页 |
| (4) 瞬时敲降2D7-Ag基因对细胞周期的影响 | 第57-58页 |
| (5) siRNA瞬时敲降对肺癌细胞粘附的作用 | 第58页 |
| (6) siRNA瞬时敲降对肺癌细胞迁移的作用 | 第58-59页 |
| (7) siRNA瞬时敲降对肺癌细胞侵袭的作用 | 第59-60页 |
| 三、结论 | 第60-65页 |
| 小结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 附录一 参加会议 | 第71页 |
| 附录二 发表文章 | 第71页 |
| 附录三 339例肺癌配对标本病理资料 | 第71-80页 |
| 个人简历 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 基金项目 | 第82页 |
