| 摘要 | 第6-8页 |
| 符号说明 | 第8-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 小麦胚乳储藏蛋白的组成和分类 | 第10-11页 |
| 1.2 小麦HMW-GS基因在染色体上的定位和一级结构 | 第11-14页 |
| 1.3 高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)与小麦品质的关系 | 第14-15页 |
| 1.4 小麦HMW-GS各种亚基组合及其对小麦品质的贡献 | 第15-17页 |
| 1.5 小麦转基因研究和HMW-GS基因遗传转化的研究 | 第17-20页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第22-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1.酶及分子生物学试剂 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第22页 |
| 2.1.3 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.4 转化所用基因及启动子序列 | 第22-23页 |
| 2.1.5 培养基及常用试剂 | 第23页 |
| 2.2.实验方法 | 第23-50页 |
| 2.2.1 高分子量麦谷蛋白亚基基因表达载体的构建 | 第23-37页 |
| 2.2.1.1 高分子量麦谷蛋白亚基1By16基因的扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.1.2 高分子量麦谷蛋白亚基1By16基因与克隆载体连接 | 第24-25页 |
| 2.2.1.3 转化大肠杆菌 | 第25页 |
| 2.2.1.4 转化子筛选鉴定 | 第25-28页 |
| 2.2.1.5 HMW-GS1Bx13和1By16基因与目的启动子的连接 | 第28-33页 |
| 2.2.1.6 HMW-GS 1Bx13和1By16基因真核表达载体的构建 | 第33-37页 |
| 2.2.2 HMW-GS基因表达载体的农杆菌转化 | 第37-38页 |
| 2.2.2.1 制备农杆菌感受态 | 第37页 |
| 2.2.2.2 质粒转化根癌农杆菌AGLI感受态 | 第37页 |
| 2.2.2.3 转化菌体的鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2.3 农杆菌苗端转化法转化小麦 | 第38-39页 |
| 2.2.3.1 小麦种子的消毒 | 第38页 |
| 2.2.3.2 小麦种子的萌发与春化 | 第38页 |
| 2.2.3.3 含转化质粒农杆菌调配 | 第38页 |
| 2.2.3.4 切苗和农杆菌转化 | 第38-39页 |
| 2.2.4 转化苗的筛选 | 第39页 |
| 2.2.5 转化苗的检测 | 第39-41页 |
| 2.2.5.1 CTAB法提取小麦基因组总DNA | 第39-40页 |
| 2.2.5.2 PCR检测 | 第40-41页 |
| 2.2.6 转基因植株种子的SDS—PAGE分析 | 第41-43页 |
| 2.2.6.1 种子蛋白的提取 | 第41页 |
| 2.2.6.2 SDS-PAGE分析 | 第41-43页 |
| 2.2.7 T1代植株基因组DNA的southern blot检测 | 第43-50页 |
| 2.2.7.1 基因组DNA的酶切、电泳 | 第43-44页 |
| 2.2.7.2 转膜 | 第44-45页 |
| 2.2.7.3 探针标记 | 第45页 |
| 2.2.7.4 杂交及检测 | 第45-50页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第50-59页 |
| 3.1 HMW-GS 1Bx13和1By16基因表达载体的构建 | 第50-55页 |
| 3.1.1 高分子量蛋白亚基1Bx16基因的扩增 | 第50页 |
| 3.1.2 高分子量蛋白亚基1Bx16基因与克隆载体pUCm-T的连接 | 第50-51页 |
| 3.1.3 HMW-GS 1Bx13和1By16基因与启动子连接及检测 | 第51-53页 |
| 3.1.4 HMW-GS 1Bx13和1By16基因真核表达载体的构建 | 第53页 |
| 3.1.5 真核表达载体转化子的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| 3.1.6 目的基因在表达载体中连接方向的检测 | 第54-55页 |
| 3.1.7 阳性农杆菌质粒酶切检测 | 第55页 |
| 3.2 转化苗的卡那霉素抗性筛选结果 | 第55-56页 |
| 3.3 转化苗的PCR检测结果 | 第56页 |
| 3.4 转基因植株的获得及其种子的SDS-PAGE分析结果 | 第56-57页 |
| 3.5 T1代植株PCR检测及基因组DNA的Southern blot检测结果 | 第57-59页 |
| 第四部分 讨论 | 第59-63页 |
| 4.1 目标基因及表达载体的特点 | 第59页 |
| 4.2 农杆菌浸染小麦生长点转化小麦新方法 | 第59-60页 |
| 4.3 转HMW-GS基因小麦在目标基因检测中的技术难度 | 第60-63页 |
| 4.3.1 PCR检测遇到的问题 | 第60-61页 |
| 4.3.2 Southern blot的难度 | 第61-62页 |
| 4.3.3 转基因在受体中的表达 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第72页 |
