| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1. 前言和综述 | 第11-18页 |
| 1.1. 肺动脉高压的研究现状 | 第11-16页 |
| 1.1.1. 肺动脉高压的定义与临床表现 | 第11页 |
| 1.1.2. 肺动脉高压的分类 | 第11页 |
| 1.1.3. 肺动脉高压的诊断和治疗 | 第11-12页 |
| 1.1.4. 引起肺动脉高压的原因 | 第12-13页 |
| 1.1.4.1. 多种因素引起肺动脉高压 | 第12-13页 |
| 1.1.4.2. 引起肺动脉高压的遗传学机制 | 第13页 |
| 1.1.4.3. 引起肺动脉高压的三种主要机制途径 | 第13页 |
| 1.1.5. 炎症和自身免疫性系统在肺动脉高压中的作用 | 第13-14页 |
| 1.1.6. TGF-β信号通路与肺动脉高压 | 第14-16页 |
| 1.1.6.1. TGF-β信号通路的作用 | 第14页 |
| 1.1.6.2. TGF-β信号通路与心血管疾病 | 第14-15页 |
| 1.1.6.3. Smad4蛋白和泛素化酶的关系 | 第15-16页 |
| 1.2. NRAGE的研究现状 | 第16-17页 |
| 1.2.1. NRAGE的功能 | 第16页 |
| 1.2.2. NRAGE促进细胞凋亡 | 第16-17页 |
| 1.3. 研究内容与意义 | 第17页 |
| 1.4. 小结 | 第17-18页 |
| 2. Nrage缺失导致肺动脉高压分子机制的研究 | 第18-47页 |
| 2.1. 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1. Nrage敲除小鼠 | 第18页 |
| 2.1.2. 试剂和器材 | 第18页 |
| 2.1.3. 细胞和质粒 | 第18-19页 |
| 2.1.4. 相关抗体 | 第19页 |
| 2.2. 实验方法 | 第19-30页 |
| 2.2.1. 小鼠尾动脉介入法测量小鼠主动脉收缩压 | 第19页 |
| 2.2.2. 小鼠超声心动 | 第19页 |
| 2.2.3. 组织学分析 | 第19-21页 |
| 2.2.3.1. 石蜡切片和H&E染色 | 第19-20页 |
| 2.2.3.2. 免疫组织化学 | 第20-21页 |
| 2.2.4. 细胞增殖与细胞周期检测 | 第21页 |
| 2.2.4.1. MTT检测 | 第21页 |
| 2.2.4.2. 细胞周期检测 | 第21页 |
| 2.2.5. 质粒和病毒的准备 | 第21-23页 |
| 2.2.5.1. 质粒的转化 | 第21-22页 |
| 2.2.5.2 质粒大提(500mL) | 第22-23页 |
| 2.2.5.3. 重组腺病毒的包装 | 第23页 |
| 2.2.5.4. 重组腺病毒的扩增 | 第23页 |
| 2.2.6. 细胞培养与细胞转染 | 第23页 |
| 2.2.6.1. 细胞培养 | 第23页 |
| 2.2.6.2. 细胞转染 | 第23页 |
| 2.2.7. Id1报告基因的检测 | 第23-24页 |
| 2.2.8. 原代小鼠成纤维细胞(MEF)的分离 | 第24页 |
| 2.2.9. Smad1/5/8的磷酸化的诱导以及CHX抑制蛋白合成 | 第24页 |
| 2.2.9.1. BMP4诱导p38、Smad1/5/8的磷酸化 | 第24页 |
| 2.2.9.2. CHX处理MEF细胞 | 第24页 |
| 2.2.10. 蛋白水平的检测 | 第24-26页 |
| 2.2.10.1. 细胞蛋白的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.10.2. 组织蛋白的提取 | 第25页 |
| 2.2.10.3. BCA法蛋白定量 | 第25页 |
| 2.2.10.4. Western blot分析 | 第25-26页 |
| 2.2.11. RNA水平的检测 | 第26-28页 |
| 2.2.11.1. 细胞RNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.11.2. 组织RNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.11.3. RNA的反转录 | 第26-27页 |
| 2.2.11.4. 荧光实时定量PCR检测(Q-PCR)检测 | 第27-28页 |
| 2.2.12. 免疫荧光和免疫共沉淀 | 第28-29页 |
| 2.2.12.1. 免疫荧光分析 | 第28页 |
| 2.2.12.2. 免疫共沉淀分析 | 第28-29页 |
| 2.2.13. 统计分析 | 第29-30页 |
| 2.3. 实验结果 | 第30-44页 |
| 2.3.1. 小鼠主动脉血压和肺动脉血压的测量 | 第30-31页 |
| 2.3.1.1. 小鼠主动血压分析 | 第30页 |
| 2.3.1.2. 小鼠肺动脉血压分析 | 第30-31页 |
| 2.3.1.3. 本节小结 | 第31页 |
| 2.3.2. 小鼠肺组织形态学分析 | 第31-32页 |
| 2.3.2.1. 小鼠肺组织H & E染色 | 第31-32页 |
| 2.3.2.2. 小鼠肺组织免疫组织化学染色(IHC)分析 | 第32页 |
| 2.3.2.3. 本节小结 | 第32页 |
| 2.3.3. 干扰NRAGE促进VSMC细胞增殖 | 第32-34页 |
| 2.3.3.1. 检测NRAGE的干扰水平 | 第32-33页 |
| 2.3.3.2. MTT检测VSMC细胞的增殖 | 第33页 |
| 2.3.3.3. 流式细胞分析VSMC细胞周期 | 第33-34页 |
| 2.3.3.4. 本节小结 | 第34页 |
| 2.3.4. Western blot分析BMPRⅡ的表达量 | 第34-35页 |
| 2.3.4.1. Western blot分析BMPRⅡ的表达 | 第34-35页 |
| 2.3.4.2. 本节小结 | 第35页 |
| 2.3.5. 免疫荧光和免疫共沉淀分析 | 第35-37页 |
| 2.3.5.1. NRAGE和BMPRⅡ结合 | 第36页 |
| 2.3.5.2. BMP4刺激后NRAGE在核中的分布减少 | 第36页 |
| 2.3.5.3. 本节小结 | 第36-37页 |
| 2.3.6. 检测NRAGE对BMP信号通路成员的影响 | 第37-38页 |
| 2.3.6.1. NRAGE对P-p38表达水平的影响 | 第37页 |
| 2.3.6.2. NRAGE对P-Smad1/5/8表达水平的影响 | 第37页 |
| 2.3.6.3. NRAGE对Id1启动子的影响 | 第37-38页 |
| 2.3.6.4. 本节小结 | 第38页 |
| 2.3.7. 检测NRG缺失之后Smad4的表达 | 第38-40页 |
| 2.3.7.1. NRAGE缺失后Smad4下调 | 第38页 |
| 2.3.7.2 NRAGE缺失后总的泛素化水平上升 | 第38-39页 |
| 2.3.7.3. NRAGE、Smurfl、Smad4的关系 | 第39-40页 |
| 2.3.7.4. 本节小结 | 第40页 |
| 2.3.8. NRAGE和Smurf1共定位的研究 | 第40-41页 |
| 2.3.8.1. 免疫荧光分析NRAGE和Smurf1的关系 | 第40-41页 |
| 2.3.8.2. 本节小结 | 第41页 |
| 2.3.9. NRAGE和Smad4共定位的研究 | 第41-42页 |
| 2.3.9.1. 免疫荧光分析NRAGE和Smad4的关系 | 第41-42页 |
| 2.3.9.2. 本节小结 | 第42页 |
| 2.3.10. Q-PCR分析 | 第42-44页 |
| 2.3.10.1. Q-PCR检测BMPR Ⅱ、Smad4和炎症相关因子表达 | 第42-43页 |
| 2.3.10.2. 本节小结 | 第43-44页 |
| 2.4. 讨论 | 第44-46页 |
| 2.5. 全文总结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 附录 | 第54-57页 |
| 在读期间的研究成果 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
