| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 真核翻译起始因子3的研究进展 | 第14-24页 |
| 1 前言 | 第14-23页 |
| ·eIF3和翻译的起始过程 | 第14-15页 |
| ·eIF3各亚基之间的相互作用 | 第15-16页 |
| ·eIF3在80s核糖体亚基中的作用 | 第16页 |
| ·eIF3在43s前起始复合体中的作用 | 第16-17页 |
| ·eIF3在48s前起始复合体中的作用 | 第17-18页 |
| ·eIF3亚基在翻译调控、细胞周期调控及癌症中的功能 | 第18-23页 |
| ·eIF3a在翻译调控中的研究 | 第18-19页 |
| ·eIF3a在细胞周期调控中的研究 | 第19-20页 |
| ·eIF3a在癌症中的研究 | 第20-21页 |
| ·eIF3e在细胞周期调控中的研究 | 第21页 |
| ·eIF3e在癌症中的研究 | 第21-22页 |
| ·eIF3f在细胞周期调控中的研究 | 第22页 |
| ·eIF3g在翻译调控中的研究 | 第22页 |
| ·eIF3h在癌症中的研究 | 第22-23页 |
| ·eIF3j在翻译调控中的研究 | 第23页 |
| ·eIF3k在翻译调控中的研究 | 第23页 |
| 2 展望 | 第23-24页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第24-26页 |
| 1 实验的目的和意义 | 第24-25页 |
| 2 实验内容 | 第25页 |
| 3 实验流程 | 第25-26页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第26-36页 |
| 1 生物信息学分析工具 | 第26页 |
| 2 BmeIF3s5基因的生物信息学分析 | 第26-34页 |
| ·BmeIF3s5基因的序列 | 第26-27页 |
| ·BmeIF3s5的氨基酸序列分析 | 第27-28页 |
| ·疏水性分析 | 第28页 |
| ·二级结构的预测 | 第28-29页 |
| ·BmeIF3s5蛋白高级结构的预测 | 第29-30页 |
| ·BmeIF3s5蛋白磷酸化位点预测 | 第30页 |
| ·BmeIF3s5蛋白信号肽分析 | 第30-31页 |
| ·跨膜结构预测 | 第31页 |
| ·功能位点分析 | 第31-32页 |
| ·BmeIF3s5氨基酸序列同源性分析 | 第32-34页 |
| ·BmeIF3s5进化树的构建 | 第34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 BMEIF3S5的表达与纯化 | 第36-61页 |
| 1 材料与试剂 | 第36-41页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36-37页 |
| ·主要试剂的配制 | 第37-41页 |
| ·大肠杆菌培养抽提质粒用溶液 | 第37页 |
| ·核酸电泳所用溶液 | 第37页 |
| ·洗涤包涵体所用溶液 | 第37-38页 |
| ·镍柱亲和层析纯化用试剂 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE用试剂 | 第38页 |
| ·Bradford检测用试剂 | 第38-41页 |
| 2 实验方法 | 第41-53页 |
| ·BmeIF3s5基因的克隆 | 第41-42页 |
| ·切胶回收PCR产物 | 第42-43页 |
| ·PCR产物与表达载体pET-28a的双酶切 | 第43-44页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第44页 |
| ·连接反应 | 第44页 |
| ·E. coli TG1、Rosetta感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第44-45页 |
| ·连接产物的转化 | 第45页 |
| ·重组pET-28a(+)-BmeIF3s5质粒的筛选与鉴定 | 第45-47页 |
| ·序列的测定反应 | 第47-48页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第48页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第48-49页 |
| ·包涵体的洗涤与溶解 | 第49页 |
| ·融合蛋白的亲和层析 | 第49-50页 |
| ·Bradofrd检测方法 | 第50页 |
| ·抗体的制备 | 第50-53页 |
| 3 实验结果 | 第53-59页 |
| ·PCR扩增完整的ORF序列 | 第53页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BmeIF3s5的鉴定 | 第53-54页 |
| ·序列测定 | 第54页 |
| ·pET-28a(+)-BmeIF3s5的诱导表达 | 第54-55页 |
| ·pET-28a(+)-BmeIF3s5表达形式的确定 | 第55-56页 |
| ·重组蛋白的纯化结果 | 第56页 |
| ·质谱分析 | 第56-57页 |
| ·抗体的效价测定 | 第57-58页 |
| ·Western blotting分析 | 第58页 |
| ·抗体的纯化 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 家蚕BmeIF3S5基因在不同组织中的鉴定 | 第61-65页 |
| 1 材料和试剂 | 第61-62页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| ·试剂的配制 | 第61-62页 |
| 2 实验方法 | 第62-63页 |
| ·家蚕五龄幼虫不同组织的获得 | 第62页 |
| ·家蚕五龄幼虫不同组织和时期总蛋白的提取 | 第62-63页 |
| ·Western blotting检测BmeIF3s5蛋白在不同组织中的分布 | 第63页 |
| ·Western blotting检测BmeIF3s5蛋白在不同时期中的分布 | 第63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| 第六章 亚细胞定位 | 第65-68页 |
| 1 材料与试剂 | 第65-66页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·试剂 | 第65页 |
| ·试剂的配制 | 第65-66页 |
| 2 实验方法 | 第66页 |
| 3 结果 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
