| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 漆酶的介绍 | 第9-10页 |
| 1.1.1 漆酶的简介 | 第9页 |
| 1.1.2 疣孢漆斑菌的简介 | 第9页 |
| 1.1.3 漆酶的来源 | 第9-10页 |
| 1.2 真菌漆酶的结构和催化反应机制 | 第10页 |
| 1.3 获得产稳定性能好漆酶菌株的有效途径 | 第10-12页 |
| 1.3.1 基因工程改造 | 第10页 |
| 1.3.2 诱变育种 | 第10-12页 |
| 1.4 漆酶的性质 | 第12-13页 |
| 1.4.1 漆酶的分子量 | 第12页 |
| 1.4.2 漆酶的等电点、最适反应温度与pH值 | 第12-13页 |
| 1.5 漆酶的分子生物学研究 | 第13页 |
| 1.5.1 漆酶旳氨基酸序列 | 第13页 |
| 1.5.2 漆酶基因的克隆 | 第13页 |
| 1.6 cDNA末端快速扩增 (RACE) 技术 | 第13-15页 |
| 1.6.1 RACE技术的简介与原理 | 第13-14页 |
| 1.6.2 RACE技术的优势 | 第14-15页 |
| 1.6.3 RACE在基因克隆上的应用 | 第15页 |
| 1.6.4 RACE在基因克隆上的发展前景 | 第15页 |
| 1.7 研究目的和意义 | 第15-17页 |
| 2 产耐高温漆酶菌株的筛选和研究 | 第17-30页 |
| 2.1 材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 菌种 | 第17页 |
| 2.1.2 试剂与仪器 | 第17页 |
| 2.1.3 溶液的配制 | 第17-18页 |
| 2.2 方法 | 第18-21页 |
| 2.2.1 酶活的测定方法 | 第18页 |
| 2.2.2 产耐热漆酶菌株的初筛 | 第18页 |
| 2.2.3 产耐热漆酶菌株的复筛 | 第18-19页 |
| 2.2.4 菌株生理指标的测定 | 第19页 |
| 2.2.5 漆酶蛋白的纯化 | 第19-20页 |
| 2.2.6 耐热漆酶的性质研究 | 第20-21页 |
| 2.3 结果分析 | 第21-27页 |
| 2.3.1 突变菌株的筛选 | 第21-22页 |
| 2.3.2 菌株生理指标测定 | 第22-24页 |
| 2.3.3 漆酶蛋白纯化结果 | 第24-25页 |
| 2.3.4 漆酶蛋白理化性质研究 | 第25-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-29页 |
| 2.5 本章小结 | 第29-30页 |
| 3 漆酶相关基因的克隆 | 第30-43页 |
| 3.1 漆酶相关基因 3' RACE片段克隆 | 第30-34页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第30页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 实验方法 | 第30-34页 |
| 3.2 漆酶相关基因 5' RACE片段克隆 | 第34-37页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第34页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第34-37页 |
| 3.3 结果分析 | 第37-41页 |
| 3.3.1 基因克隆结果 | 第37-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-42页 |
| 3.5 本章小结 | 第42-43页 |
| 4 基因克隆结果与生物信息分析 | 第43-56页 |
| 4.1 MF-01 基因的获得 | 第43-46页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.1.2 总RNA提取 | 第43页 |
| 4.1.3 引物设计 | 第43-44页 |
| 4.1.4 反转录体系 | 第44页 |
| 4.1.5 PCR反应 | 第44-45页 |
| 4.1.6 PCR产物纯化与载体连接 | 第45-46页 |
| 4.2 结果分析 | 第46-47页 |
| 4.3 生物信息学分析 | 第47-54页 |
| 4.3.1 漆酶相关基因特征及系统进化分析 | 第47-50页 |
| 4.3.2 GH-05 与MF-01 漆酶蛋白的一二级结构预测 | 第50-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-55页 |
| 4.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |