| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-24页 |
| ·植物内生菌 | 第13-18页 |
| ·植物内生菌的概念 | 第13页 |
| ·植物内生菌的生物多样性及其分布 | 第13-14页 |
| ·植物内生细菌的分离、鉴定及检测 | 第14页 |
| ·植物内生菌的侵染定殖过程 | 第14-15页 |
| ·植物内生菌的生物学作用及其机制 | 第15-16页 |
| ·植物内生细菌的改造与利用 | 第16-17页 |
| ·植物内生菌应用前景 | 第17页 |
| ·枯草芽孢杆菌研究现状 | 第17-18页 |
| ·激发子简述 | 第18-23页 |
| ·激发子的分类 | 第19-22页 |
| ·激发子的作用机制 | 第22-23页 |
| ·研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 蛋白激发子PeaT1 重组表达载体的构建 | 第24-34页 |
| ·材料与方法 | 第24页 |
| ·实验菌株与材料 | 第24页 |
| ·实验仪器与耗材 | 第24页 |
| ·培养基与缓冲液 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-31页 |
| ·peaT1 基因序列的PCR 扩增 | 第24-25页 |
| ·细菌基因组提取 | 第25页 |
| ·P_(43) 启动子与nprB 信号肽编码序列的克隆 | 第25-26页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第26-27页 |
| ·SOE (Splicing by over lapping extension)PCR 反应 | 第27页 |
| ·PCR 产物与pMD18-T simple 载体的连接 | 第27-28页 |
| ·转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第28页 |
| ·阳性克隆的PCR 鉴定 | 第28页 |
| ·质粒提取 | 第28-29页 |
| ·T 载体与穿梭载体pHY300-PLK 的双酶切 | 第29页 |
| ·酶切产物的回收 | 第29-30页 |
| ·酶切产物的连接 | 第30页 |
| ·pHY43N-peaT1 转化大肠杆菌感受态细胞 | 第30页 |
| ·pHY43N-peaT1 阳性克隆的鉴定 | 第30-31页 |
| ·pHY43N-peaT1 质粒提取 | 第31页 |
| ·pHY43N-peaT1 的酶切鉴定 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-33页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·重组表达载体的菌体PCR 鉴定 | 第32页 |
| ·重组表达载体pHY43N- peaT1 的限制性酶切分析 | 第32-33页 |
| ·讨论与小结 | 第33-34页 |
| 第三章 PeaT1 枯草芽孢杆菌工程菌株的构建及其分泌表达 | 第34-51页 |
| ·材料和方法 | 第34-42页 |
| ·菌株和植物材料 | 第34页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第34页 |
| ·枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第34-35页 |
| ·阳性克隆菌液PCR 检测 | 第35页 |
| ·阳性克隆的质粒提取及检测 | 第35页 |
| ·重组菌株RNA 提取 | 第35-36页 |
| ·RNA 质量检测方法 | 第36页 |
| ·cDNA 合成 | 第36-37页 |
| ·工程菌株的生长曲线测定 | 第37-38页 |
| ·工程菌株稳定性测定 | 第38页 |
| ·目的蛋白的SDS-PAGE 检测 | 第38-40页 |
| ·Western-blotting 分析 | 第40页 |
| ·蛋白质的丙酮浓缩 | 第40-41页 |
| ·PeaT1 在 B. subtilis WB800 中的分泌表达及检测 | 第41页 |
| ·目的蛋白PeaT1 的纯化 | 第41-42页 |
| ·蛋白浓度测定方法 | 第42页 |
| ·工程菌株胞外产物生物活性 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-49页 |
| ·重组菌株的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组菌株总RNA 的提取 | 第43页 |
| ·重组菌株的RT-PCR | 第43-44页 |
| ·PeaT1 分泌表达的SDS-PAGE 分析 | 第44-45页 |
| ·PeaT1 的Western blotting 分析 | 第45页 |
| ·工程菌株WB800-PeaT1 的生长曲线测定 | 第45-46页 |
| ·工程菌株WB800-PeaT1 稳定性分析 | 第46-47页 |
| ·PeaT1 的纯化结果及其浓度测定 | 第47-48页 |
| ·工程菌胞外分泌物对幼苗生长的影响 | 第48-49页 |
| ·讨论与小结 | 第49-51页 |
| 第四章 工程菌株的定殖回收检测 | 第51-60页 |
| ·材料和方法 | 第51-54页 |
| ·供试材料 | 第51页 |
| ·工程菌在水稻、小麦体内定殖的分离 | 第51页 |
| ·常规鉴定 | 第51-52页 |
| ·回收菌株的PCR 检测 | 第52页 |
| ·回收菌株16S rDNA 序列分析 | 第52-53页 |
| ·植物总蛋白的提取及Western-blotting 检测 | 第53页 |
| ·不同接种方法对工程菌在水稻、小麦和番茄内定殖影响的测定 | 第53-54页 |
| ·不同浓度菌液浸种对工程菌在水稻、小麦体内定殖影响的检测 | 第54页 |
| ·不同浸种时间对工程菌在水稻、小麦体内定殖影响的检测 | 第54页 |
| ·工程菌在植物体内的定殖动态 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-59页 |
| ·回收菌株的PCR 检测 | 第54-55页 |
| ·回收菌株的16S rDNA 检测 | 第55页 |
| ·小麦和水稻植物体内PeaT1 的Western-blotting | 第55-56页 |
| ·不同接种方法对工程菌WB800-PeaT1 在不同植物体内定殖的影响 | 第56页 |
| ·工程菌株WB800-PeaT1 在植物根、茎、叶组织中的定殖 | 第56-57页 |
| ·不同浓度菌液处理对工程菌在植物体内定殖的影响 | 第57-58页 |
| ·不同浸种时间对工程菌在植物体内定殖的影响 | 第58页 |
| ·工程菌株在植物体内的定殖动态 | 第58-59页 |
| ·讨论与小结 | 第59-60页 |
| 第五章 工程菌株的生物活性检测 | 第60-69页 |
| ·材料和方法 | 第60-62页 |
| ·供试菌株和植物 | 第60页 |
| ·培养液、菌体和胞外分泌物对小麦的促生作用 | 第60页 |
| ·工程菌株对小麦幼苗生长及抗旱性的测定 | 第60页 |
| ·工程菌对小麦根系活力的测定 | 第60-61页 |
| ·工程菌对番茄相关防御酶活性的影响 | 第61-62页 |
| ·工程菌对番茄抗灰霉病的拮抗作用 | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-67页 |
| ·培养液、菌体和胞外分泌物对小麦的促生作用 | 第62-63页 |
| ·不同浓度工程菌株对小麦生长的促进作用 | 第63-64页 |
| ·工程菌对小麦抗旱性及其根活力的影响 | 第64-65页 |
| ·工程菌对番茄叶片过氧化物酶（POD）活性的影响 | 第65页 |
| ·工程菌对番茄叶片多酚氧化酶（PPO）活性的影响 | 第65-66页 |
| ·工程菌对番茄叶片苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性的影响 | 第66-67页 |
| ·工程菌对番茄抗灰霉病的拮抗作用 | 第67页 |
| ·讨论与小结 | 第67-69页 |
| 第六章 全文总结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简介 | 第76页 |
