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H5N1亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备与血凝素HA基因的体外高效表达和纯化

摘要第1-7页
Abstract第7-10页
英文缩略表第10-12页
第一章 绪论第12-21页
   ·禽流感的概述第12页
   ·高致病性禽流感的爆发及其公共卫生意义第12-14页
   ·高致病性禽流感的分子生物学特性第14-15页
   ·禽流感病毒(Avian Influenza Virus, AIV)的生物学特性第15-17页
   ·血凝素 (Hemagglutinin HA)第17-18页
     ·HA 结构和功能第17页
     ·HA 裂解与流感病毒的致病性的关系第17-18页
   ·高致病性禽流感诊断及防制第18-20页
   ·本研究的目的与意义第20-21页
第二章 针对流感病毒血凝素 HA 蛋白单抗的制备及鉴定第21-33页
   ·实验材料第21-22页
     ·病毒株、细胞及实验动物第21页
     ·实验主要试剂第21页
     ·实验仪器及设备第21-22页
     ·实验主要溶液与其配制第22页
   ·实验方法第22-26页
     ·动物免疫第22-23页
     ·饲养细胞的制备第23页
     ·小鼠的骨髓瘤细胞的准备第23页
     ·细胞融合第23-24页
     ·筛选阳性杂交瘤细胞第24页
     ·腹水制备及纯化第24-25页
     ·单克隆抗体的鉴定第25-26页
   ·结果第26-31页
     ·细胞融合率及阳性率第26-27页
     ·杂交瘤细胞的染色体数第27页
     ·抗体亚类鉴定第27页
     ·杂交瘤细胞稳定性检测第27-28页
     ·腹水效价的检测第28页
     ·广谱性检测第28-29页
     ·特异性检测结果第29-30页
     ·间接免疫荧光实验结果第30-31页
   ·讨论第31-33页
     ·免疫原的选择及小鼠免疫效果第31页
     ·杂交瘤细胞株的建立第31页
     ·单克隆抗体的制备第31-32页
     ·单克隆抗体的应用价值第32-33页
第三章 血凝素 HA 基因的体外高效表达和纯化第33-51页
   ·实验材料第33-35页
     ·引物第33页
     ·细胞株第33页
     ·载体和试剂第33-34页
     ·仪器设备第34页
     ·主要溶液及其配制第34-35页
   ·实验方法第35-42页
     ·AIV HA 基因的扩增第35-36页
     ·重组原核载体PFastbac1-HA 的构建与鉴定第36-38页
     ·重组转座子的构建及鉴定第38页
     ·转染第38-39页
     ·免疫荧光检测第39页
     ·重组杆状病毒的扩大培养第39页
     ·表达蛋白的HIS 纯化第39-40页
     ·表达蛋白的鉴定第40-41页
     ·凝胶过滤层析结果第41-42页
     ·纯化蛋白的活性检测第42页
   ·结果第42-48页
     ·HA 基因扩增结果第42-43页
     ·转移载体和PCR 产物双酶切结果第43-44页
     ·重组质粒PCR 鉴定第44页
     ·重组转座子的PCR 鉴定结果第44-45页
     ·免疫荧光鉴定结果第45页
     ·His 纯化的蛋白的 SDS-PAGE 鉴定第45-46页
     ·His 纯化的蛋白的 Western-blotting 鉴定第46页
     ·重组蛋白纯化结果及鉴定第46-48页
     ·纯化蛋白的活性检测结果第48页
   ·讨论第48-51页
     ·本研究的目的第48-49页
     ·凝胶过滤层析条件的优化及实验结果的分析第49页
     ·需要解决的关键问题及创新点第49页
     ·研究成果的意义和应用前景第49-51页
第四章 全文结论第51-52页
参考文献第52-58页
致谢第58-59页
作者简介第59页

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