| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| ·C 型口蹄疫及其病原的研究现状 | 第14-15页 |
| ·C 型口蹄疫病原特征 | 第14-15页 |
| ·C 型口蹄疫流行病学 | 第15页 |
| ·口蹄疫新型疫苗的研究概况 | 第15-18页 |
| ·传统疫苗的优缺点 | 第15-16页 |
| ·新型口蹄疫疫苗的研究概况 | 第16-17页 |
| ·小结 | 第17-18页 |
| ·基因工程亚单位疫苗的研究进展及口蹄疫基因工程亚单位疫苗的研究动态 | 第18-20页 |
| ·基因工程亚单位疫苗的优缺点 | 第18页 |
| ·各种表达系统应用策略 | 第18-20页 |
| ·口蹄疫基因工程亚单位疫苗的研究动态 | 第20页 |
| ·小结 | 第20页 |
| ·本研究的目的及技术路线 | 第20-22页 |
| 第二章 C 型口蹄疫病毒结构基因VP1、VP3 及VP0 的克隆及表达载体构建 | 第22-33页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·病毒、载体及菌株 | 第22页 |
| ·酶及主要试剂 | 第22页 |
| ·实验用溶液及配方 | 第22-23页 |
| ·仪器 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-29页 |
| ·病毒RNA 的提取 | 第23-24页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·RT-PCR 反转录扩增C 型FMDV P1 基因 | 第24-25页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第25页 |
| ·目的基因的克隆 | 第25-26页 |
| ·胶回收纯化产物与pMD18-T 载体连接 | 第25页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的提取 | 第26页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第26页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·结构基因VP1、VP3 及VP0 的PCR 扩增 | 第27页 |
| ·PCR 产物回收及纯化 | 第27页 |
| ·PCR 胶回收产物与表达载体连接 | 第27-28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28页 |
| ·重组质粒的提取 | 第28页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第29页 |
| ·实验结果 | 第29-32页 |
| ·P1 基因扩增 | 第29页 |
| ·P1 基因克隆 | 第29页 |
| ·P1 基因序列测定 | 第29-30页 |
| ·结构基因VP1、VP3 及VP0 的扩增 | 第30页 |
| ·VP1、VP3 及VP0 基因克隆 | 第30页 |
| ·VP1、VP3 及VP0 基因序列测定 | 第30-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 C 型口蹄疫病毒结构蛋白编码基因的原核表达及可溶性表达条件摸索 | 第33-44页 |
| ·试验材料 | 第33-34页 |
| ·感受态细胞及主要试剂 | 第33页 |
| ·聚丙烯凝胶电泳（SDS-PAGE）所需主要溶液 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-36页 |
| ·重组质粒转化入感受态细胞 | 第34页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·重组菌液的诱导表达及可溶性分析 | 第34-35页 |
| ·蛋白质可溶性表达预测 | 第35-36页 |
| ·实验结果 | 第36-43页 |
| ·蛋白表达及可溶性分析 | 第36-42页 |
| ·蛋白质可溶性表达预测 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| 第四章 C 型口蹄疫结构各基因与 pET-30a 表达载体融合表达产物的纯化 | 第44-52页 |
| ·试验材料 | 第44-45页 |
| ·试验用主要试剂 | 第44页 |
| ·实验所需各种溶液及其配制 | 第44-45页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·包涵体洗涤及纯化使用的主要溶液 | 第44-45页 |
| ·Western-blotting 使用主要溶液 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-47页 |
| ·包涵体变性与复性 | 第45-46页 |
| ·表达蛋白的制备 | 第45页 |
| ·包涵体洗涤与变性 | 第45页 |
| ·包涵体复性 | 第45-46页 |
| ·Western-blotting | 第46-47页 |
| ·实验结果 | 第47-50页 |
| ·包涵体洗涤与变性 | 第47页 |
| ·包涵体复性 | 第47页 |
| ·Western-blotting 检测复性蛋白反应原性 | 第47-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 猪α-干扰素的原核表达载体构建、诱导表达及产物纯化 | 第52-59页 |
| ·试验材料 | 第52页 |
| ·菌株、试验动物及主要试剂 | 第52页 |
| ·实验所需主要溶液及其配制 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-55页 |
| ·引物设计 | 第52页 |
| ·成熟猪α干扰素基因克隆 | 第52-53页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第53页 |
| ·PCR 胶回收产物与表达载体连接 | 第53-54页 |
| ·连接产物的转化 | 第54页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第54页 |
| ·重组质粒的转化 | 第54页 |
| ·重组质粒的诱导表达及可溶性分析 | 第54-55页 |
| ·表达产物的纯化 | 第55页 |
| ·纯化产物的Western-blotting 分析 | 第55页 |
| ·实验结果 | 第55-58页 |
| ·猪α干扰素成熟蛋白基因扩增 | 第55页 |
| ·猪α干扰素成熟蛋白基因克隆 | 第55页 |
| ·猪α干扰素成熟蛋白基因序列测定 | 第55页 |
| ·重组质粒pET-poIFNα的诱导表达与可溶性分析 | 第55-56页 |
| ·表达产物的纯化 | 第56页 |
| ·复性包涵体的Western-blotting 分析 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 第六章 复性后C 型口蹄疫病毒重组结构蛋白VP1、VP3 及猪α-干扰素免疫原性测定 | 第59-62页 |
| ·实验材料 | 第59页 |
| ·病毒、细胞和实验动物 | 第59页 |
| ·主要试剂及配制方法 | 第59页 |
| ·ELISA 需要使用的试剂及配置方法 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-60页 |
| ·抗原制备 | 第59-60页 |
| ·动物免疫 | 第60页 |
| ·血清抗体动态监测 | 第60页 |
| ·实验结果 | 第60-61页 |
| ·小鼠血清抗体的测定 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| 第七章 全文结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-73页 |
| 作者简历 | 第73页 |
