| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 前沿与综述 | 第10-21页 |
| 1.1 糖尿病的现状及治疗 | 第10-13页 |
| 1.1.1 国内外糖尿病现状 | 第10页 |
| 1.1.2 糖尿病类型 | 第10-11页 |
| 1.1.3 糖尿病发生原因 | 第11-12页 |
| 1.1.4 糖尿病的治疗 | 第12-13页 |
| 1.2 苦瓜降血糖药用价值 | 第13-16页 |
| 1.2.1 苦瓜简介 | 第13页 |
| 1.2.2 苦瓜降血糖机理 | 第13-15页 |
| 1.2.3 苦瓜降血糖研究 | 第15-16页 |
| 1.3 苦瓜降糖多肽的研究进展 | 第16页 |
| 1.4 实时荧光定量PCR原理与技术 | 第16-20页 |
| 1.4.1 实时荧光定量PCR的原理与方法 | 第16-17页 |
| 1.4.2 实时荧光定量PCR实验流程 | 第17-19页 |
| 1.4.3 实时荧光定量PCR结果分析 | 第19-20页 |
| 1.5 本课题的目的与意义 | 第20-21页 |
| 第2章 材料与方法 | 第21-30页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第21-24页 |
| 2.1.1 试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.2 缓冲液配方 | 第22页 |
| 2.1.3 培养基成分与配方 | 第22页 |
| 2.1.4 载体和菌种 | 第22-23页 |
| 2.1.5 苦瓜种子的收集 | 第23页 |
| 2.1.6 实验仪器与设备 | 第23-24页 |
| 2.1.7 生物学软件与网站 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 遗传学方法 | 第24页 |
| 2.2.1.1 感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 2.2.1.2 大肠杆菌转化实验 | 第24页 |
| 2.2.2 微生物学实验方法 | 第24-25页 |
| 2.2.2.1 大肠杆菌培养条件 | 第24-25页 |
| 2.2.2.2 菌种保藏 | 第25页 |
| 2.2.3 分子生物学方法 | 第25页 |
| 2.2.3.1 质粒抽提 | 第25页 |
| 2.2.3.2 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| 2.2.3.3 试剂盒回收凝胶DNA | 第25页 |
| 2.2.4 DNA抽提实验方法 | 第25页 |
| 2.2.4.1 基因组DNA抽提 | 第25页 |
| 2.2.4.2 基因组DNA质量鉴定 | 第25页 |
| 2.2.5 RNA抽提实验操作方法 | 第25-27页 |
| 2.2.5.1 实验前准备与实验材料处理 | 第25页 |
| 2.2.5.2 苦瓜种子RNA抽提 | 第25-27页 |
| 2.2.5.2.1 经典Trizol裂解法与改进Trizol法的比较 | 第26-27页 |
| 2.2.5.2.2 RNA纯度及完整性检测 | 第27页 |
| 2.2.6 逆转录PCR反应 | 第27-28页 |
| 2.2.7 苦瓜中活性多肽-P的鉴定 | 第28-30页 |
| 第3章 实验结果与讨论 | 第30-69页 |
| 3.1 苦瓜的种植与核酸提取 | 第30-37页 |
| 3.1.1 苦瓜的种植 | 第30-32页 |
| 3.1.2 苦瓜DNA提取 | 第32-34页 |
| 3.1.3 苦瓜总RNA提取 | 第34-36页 |
| 3.1.3.1 两种RNA抽提方法的比较 | 第34-35页 |
| 3.1.3.2 苦瓜总RNA纯度检测 | 第35-36页 |
| 3.1.4 不同品种苦瓜果肉RNA的抽提 | 第36-37页 |
| 3.2 逆转录cDNA质量鉴定 | 第37-42页 |
| 3.2.1 RNA中去除DNA污染的方法比较 | 第37-40页 |
| 3.2.1.1 采用DNase Ⅰ去除RNA中的DNA污染 | 第38页 |
| 3.2.1.2 采用磁珠获得高纯度的RNA | 第38-39页 |
| 3.2.1.3 采用gDNA方式去除RNA中的DNA | 第39-40页 |
| 3.2.2 多肽P检测引物的筛选 | 第40-42页 |
| 3.3 内参基因的筛选 | 第42-54页 |
| 3.3.1 苦瓜特异性内参基因的查找 | 第42-44页 |
| 3.3.2 苦瓜常见内参基因的获得 | 第44-54页 |
| 3.3.2.1 苦瓜18S rRNA内参基因的获得 | 第44-48页 |
| 3.3.2.2 苦瓜β-actin内参基因的获得 | 第48-54页 |
| 3.4 实时荧光定量PCR | 第54-69页 |
| 3.4.1 目的基因多肽P特异性引物的设计与优化 | 第56-58页 |
| 3.4.2 实时荧光定量PCR两步法与三步法的比较 | 第58-59页 |
| 3.4.3 实时荧光定量PCR引物检测 | 第59-65页 |
| 3.4.3.1 通过溶解曲线检测引物 | 第59-60页 |
| 3.4.3.2 实时荧光定量PCR引物标准曲线分析 | 第60-65页 |
| 3.4.3.2.1 18S rRNA标准曲线制备 | 第61-62页 |
| 3.4.3.2.2 β-actin标准曲线制备 | 第62-63页 |
| 3.4.3.2.3 多肽P目的基因引物SSDP标准曲线制备 | 第63-65页 |
| 3.4.4 不同苦瓜品种实时荧光定量PCR分析 | 第65-69页 |
| 第4章 结论与展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
