| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 引言及文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 果蝇模型是进行遗传学研究的理想模式生物 | 第10-11页 |
| 1.2 果蝇心脏发育相关基因及信号途径 | 第11-16页 |
| 1.2.1 中胚层分化 | 第11页 |
| 1.2.2 背部中胚层分化 | 第11-13页 |
| 1.2.3 心脏前体细胞分化 | 第13页 |
| 1.2.4 心肌与副心肌细胞分化 | 第13-15页 |
| 1.2.5 背部心管的分化 | 第15-16页 |
| 1.3 果蝇的TGFβ分子——Dpp | 第16-17页 |
| 1.4 果蝇CG3295基因及研究意义 | 第17-18页 |
| 1.5 本课题的研究意义 | 第18-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-36页 |
| 2.1 材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 生物信息学软件 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 质粒和菌株 | 第21页 |
| 2.1.4 缓冲液和培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.5 主要实验仪器和耗材 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-36页 |
| 2.2.1 CG3295、Dad、Mad、Smox基因的生物信息学分析 | 第23页 |
| 2.2.2 引物设计与合成 | 第23-24页 |
| 2.2.3 PCR扩增 | 第24页 |
| 2.2.4 PCR产物纯化回收 | 第24-25页 |
| 2.2.5 载体连接实验 | 第25页 |
| 2.2.6 感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.7 连接产物转化 | 第26页 |
| 2.2.8 质粒的小量制备 | 第26-27页 |
| 2.2.9 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第27页 |
| 2.2.10 测序 | 第27页 |
| 2.2.11 重组质粒的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.12 组织样品RNA的抽提 | 第28-29页 |
| 2.2.13 反转录 | 第29页 |
| 2.2.14 细胞培养 | 第29-30页 |
| 2.2.15 细胞瞬时转染 | 第30页 |
| 2.2.16 蛋白提取 | 第30-31页 |
| 2.2.17 哺乳动物细胞双杂交 | 第31-33页 |
| 2.2.18 免疫共沉淀 | 第33-34页 |
| 2.2.19 Westerblot免疫印迹分析 | 第34-36页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第36-54页 |
| 3.1 结果 | 第36-52页 |
| 3.1.1 CG3295、Dad、Mad、Smox基因的克隆与鉴定 | 第36-44页 |
| 3.1.2 CG3295、Dad、Mad、Smox原核与真核表达质粒的构建 | 第44-50页 |
| 3.1.3 细胞双杂交实验 | 第50-51页 |
| 3.1.4 Dad蛋白与CG3295蛋白的免疫共沉淀实验 | 第51-52页 |
| 3.2 讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 其它工作 | 第54-62页 |
| 4.1 Nulp1(TCF25)条件敲除打靶载体的构建 | 第54-62页 |
| 4.1.1 Nulp1基因背景资料介绍 | 第54页 |
| 4.1.2 Nulp1条件敲除载体的设计方案和构建策略 | 第54-56页 |
| 4.1.3 Nulp1各同源臂的引物设计 | 第56页 |
| 4.1.4 筛选中靶ES细胞使用的探针设计 | 第56-58页 |
| 4.1.5 Nulp1的5'同源臂的克隆 | 第58-59页 |
| 4.1.6 Nulp1的中间同源臂的克隆 | 第59-60页 |
| 4.1.7 Nulp1的3'同源臂的克隆 | 第60页 |
| 4.1.8 Nulp1同源重组载体验证 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
