| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第10-17页 |
| 1 传染性支气管炎病毒概述 | 第10-14页 |
| 1.1 IBV病原学 | 第10-11页 |
| 1.2 基因组结构 | 第11页 |
| 1.3 主要结构蛋白 | 第11-12页 |
| 1.4 IBV的N蛋白研究进展 | 第12-14页 |
| 2 IB在国内的流行情况 | 第14页 |
| 3 IBV检测方法研究进展及抗IBV单克隆抗体的制备和应用 | 第14-17页 |
| 3.1 气管环培养 | 第15页 |
| 3.2 RT-PCR方法 | 第15页 |
| 3.3 探针法 | 第15页 |
| 3.4 实时荧光定量PCR | 第15-16页 |
| 3.5 噬菌体ELISA | 第16页 |
| 3.6 酶联免疫吸附试验 | 第16-17页 |
| 第一章 IBV N蛋白的原核表达以及多克隆抗体和单克隆抗体的制备 | 第17-36页 |
| 1 材料 | 第17-19页 |
| 1.1 实验动物 | 第17页 |
| 1.2 毒株、细胞、菌株以及载体 | 第17-18页 |
| 1.3 主要试剂 | 第18页 |
| 1.4 仪器设备 | 第18页 |
| 1.5 主要溶剂的配制 | 第18-19页 |
| 2 方法 | 第19-28页 |
| 2.1 IBV N蛋白的原核表达 | 第19-23页 |
| 2.2 兔源抗IBV N蛋白PcAb的制备与鉴定 | 第23-25页 |
| 2.3 鼠源抗IBV N蛋白MAb的制备 | 第25-28页 |
| 2.4 单克隆抗体的鉴定 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-34页 |
| 3.1 原核表达产物鉴定 | 第28-31页 |
| 3.2 间接ELISA检测方法的建立 | 第31-32页 |
| 3.3 兔源抗IBV PcAb的鉴定 | 第32-33页 |
| 3.4 免疫小鼠的抗体效价 | 第33页 |
| 3.5 杂交瘤细胞的亚克隆 | 第33页 |
| 3.6 单克隆抗体的鉴定 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 第二章 双抗体夹心ELISA检测方法的建立 | 第36-45页 |
| 1 双抗体夹心ELISA检测方法的初步研究 | 第36-37页 |
| 1.1 最佳多抗包被浓度及单抗工作浓度的确定 | 第36页 |
| 1.2 最佳封闭液的确定 | 第36-37页 |
| 1.3 HRP酶标抗体的工作浓度的确定 | 第37页 |
| 1.4 底物作用时间的确定 | 第37页 |
| 1.5 双抗体夹心ELISA检测方法阴阳性临界值的确定 | 第37页 |
| 2 双抗体夹心ELISA检测方法的评价 | 第37-38页 |
| 2.1 特异性试验 | 第37-38页 |
| 2.2 重复性试验 | 第38页 |
| 2.3 符合性试验 | 第38页 |
| 2.4 临床样品的检测 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-43页 |
| 3.1 最佳多抗包被浓度及单抗工作浓度的确定 | 第38-39页 |
| 3.2 最佳封闭液的确定 | 第39-40页 |
| 3.3 HRP酶标抗体的工作浓度的确定 | 第40页 |
| 3.4 底物作用时间的确定 | 第40页 |
| 3.5 双抗体夹心ELISA检测方法阴阳性临界值的确定 | 第40-41页 |
| 3.6 特异性试验 | 第41页 |
| 3.7 重复性试验 | 第41-43页 |
| 3.8 符合性试验 | 第43页 |
| 3.9 临床样品的检测 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 全文总结 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
