| 中文摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 符号说明 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1 禽致病性大肠杆菌概述 | 第13-14页 |
| 2 禽致病性大肠杆菌的主要毒力因子 | 第14-18页 |
| 2.1 黏附素(Adhesins) | 第14-15页 |
| 2.2 铁摄取系统(Iron acquisition systems) | 第15-16页 |
| 2.3 溶血素 | 第16页 |
| 2.4 血清抗性蛋白(Increased serum survival,Iss) | 第16页 |
| 2.5 大肠杆菌素(Colicins) | 第16-17页 |
| 2.6 荚膜(Capsule) | 第17页 |
| 2.7 毒素(Toxins) | 第17页 |
| 2.8 脂多糖(LPS) | 第17页 |
| 2.9 外膜蛋白(Outer membrane proteins, OMPs) | 第17-18页 |
| 3 sodA基因的研究进展 | 第18-19页 |
| 4 大肠杆菌基因编辑研究进展 | 第19-21页 |
| 5 大肠杆菌生物被膜研究进展 | 第21-23页 |
| 第二章 DNA芯片分析禽致病性大肠杆菌O2血清型菌株E058在感染鸡体内的转录组学 | 第23-39页 |
| 1 材料 | 第23-25页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第23-24页 |
| 1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 1.3 主要仪器 | 第24页 |
| 1.4 分子生物学及数据分析软件 | 第24-25页 |
| 1.5 试验动物 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-29页 |
| 2.1 菌体的准备 | 第25页 |
| 2.2 细菌总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.3 基因组DNA的去除反应 | 第26页 |
| 2.4 反转录反应 | 第26页 |
| 2.5 cDNA标记和杂交 | 第26页 |
| 2.6 cDNA的荧光定量PCR | 第26-28页 |
| 2.7 突变株构建及1日龄雏鸡半数致死量试验 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-37页 |
| 3.1 APEC E058株在感染鸡体内的基因转录表达谱 | 第29-34页 |
| 3.2 参与代谢过程的基因表达 | 第34页 |
| 3.3 细胞外基质成分的表达 | 第34-35页 |
| 3.3.1 荚膜和脂多糖 | 第34页 |
| 3.3.2 外膜蛋白(OMPs) | 第34页 |
| 3.3.3 菌毛 | 第34-35页 |
| 3.4 铁摄取系统的表达 | 第35页 |
| 3.5 参与应激反应基因的表达 | 第35-36页 |
| 3.6 参与转录的基因调控 | 第36页 |
| 3.7 半数致死量(LD_(50))结果 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 APEC sodA基因突变株的构建及其致病性的评价 | 第39-57页 |
| 1 材料 | 第39-41页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第39-40页 |
| 1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 1.3 溶液配制 | 第40页 |
| 1.4 主要仪器 | 第40-41页 |
| 1.5 分子生物学及数据分析软件 | 第41页 |
| 1.6 试验动物 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41-48页 |
| 2.1 sodA-Cat片段的扩增 | 第41-42页 |
| 2.2 将sodA-Cat片段电转化入感受态细胞中构建突变株 | 第42-43页 |
| 2.2.1 电转化感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 2.2.2 质粒pKD46的转化 | 第42页 |
| 2.2.3 Red重组功能的诱导和感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 2.2.4 电转化构建突变株 | 第42-43页 |
| 2.2.5 质粒pKD46的消除 | 第43页 |
| 2.3 突变株的回复拯救试验 | 第43-45页 |
| 2.3.1 sodA完整基因片段及其启动子序列的扩增 | 第43页 |
| 2.3.2 重组质粒pACYC184-sodA的构建 | 第43-44页 |
| 2.3.3 回复拯救株的获得 | 第44-45页 |
| 2.4 突变株生物学特性的研究 | 第45-46页 |
| 2.4.1 细菌在普通LB培养基中生长曲线的测定 | 第45页 |
| 2.4.2 体外竞争试验 | 第45页 |
| 2.4.3 SPF鸡血清杀菌试验 | 第45页 |
| 2.4.4 菌株生物被膜检测 | 第45-46页 |
| 2.4.5 环境应激实验 | 第46页 |
| 2.4.6 体外抗氧化应激实验 | 第46页 |
| 2.5 突变株致病性的研究 | 第46-48页 |
| 2.5.1 半数致死量(LD_(50))试验 | 第46-47页 |
| 2.5.2 体内动态分布试验 | 第47页 |
| 2.5.3 HD-11细胞的吞噬试验 | 第47页 |
| 2.5.4 胞内细菌增殖试验 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-55页 |
| 3.1 sodA-Cat片段的扩增结果 | 第48页 |
| 3.2 突变株E058ΔsodA的鉴定 | 第48页 |
| 3.3 突变株的回复拯救结果 | 第48-50页 |
| 3.4 突变株生物学特性的研究结果 | 第50-53页 |
| 3.4.1 E058及突变株在LB液体培养基中的生长曲线 | 第50页 |
| 3.4.2 体外竞争结果 | 第50-51页 |
| 3.4.3 SPF鸡血清杀菌试验结果 | 第51页 |
| 3.4.4 菌株生物被膜检测 | 第51-52页 |
| 3.4.5 环境应激实验结果 | 第52页 |
| 3.4.6 体外抗氧化应激实验结果 | 第52-53页 |
| 3.5 突变株致病性的研究 | 第53-55页 |
| 3.5.1 半数致死量(LD50)试验 | 第53页 |
| 3.5.2 体内动态分布试验 | 第53-54页 |
| 3.5.3 HD-11细胞的吞噬试验 | 第54-55页 |
| 3.5.4 胞内细菌增殖试验 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 全文结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第74-75页 |
